\u2022 Este protocolo se ha utilizado para 250 \u03bcg de digesti\u00f3n de c\u00e9lulas HELA y 2,5 mg de perlas. Ajustar los vol\u00famenes de buffers de lavado y uni\u00f3n para cantidades m\u00e1s altas de perlas\/prote\u00ednas.
<\/div>\n\n\n\n
<\/p>\n\n\n\n
Envio y Almacenamiento<\/mark><\/p>\n\n\n\nEl producto se envia a temperatura ambiente. Almacenamiento a corto plazo es en buffer de equilibrio (ver protocolo). Almacenamiento a largo plazo es en etanol al 20 % a 4 \u00b0C.<\/p>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n
Caracteristicas<\/mark><\/p>\n\n\n\nUso<\/td> Enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos<\/td><\/tr> Especificidad<\/td> Afinidad a biomol\u00e9culas fosforiladas<\/td><\/tr> Bead ligand<\/td> Ti-NTA<\/td><\/tr> Tama\u00f1o perla<\/td> 30 \u00b5m<\/td><\/tr> Filling quantity<\/td> Entrega como una suspensi\u00f3n del 25%<\/td><\/tr> Chelator stability<\/td> Estable en buffer conteniendo 10 mM DTT y 1 mM EDTA<\/td><\/tr> Estabilidad pH <\/td> 2-14<\/td><\/tr> Otras estabilidades<\/td> 100% methanol, 100% ethanol, 8 M urea, 6 M guanidinium hydrochloride, 30% (v\/v) acetonitrile<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n<\/div>\n\n\n\n
Resultado de Laboratorio<\/mark><\/p>\n\n\n\nFosfoprote\u00f3mica autom\u00e1tica para proyectos de alto rendimiento. <\/mark><\/p>\n\n\n\nSe ha demostrado que las perlas magn\u00e9ticas Ti-NTA de Cube Biotech aumentan dr\u00e1sticamente la velocidad de un experimento de alto rendimiento. Leutert et al. (2019) presentaron la aplicaci\u00f3n de PureCube Fe-NTA MagBeads en un procedimiento que llamaron R2-P2, que es la abreviatura de Rapid-Robotic PhosphoProteomics. Utilizaron un KingFisherTM Flex para sus ejecuciones rob\u00f3ticas para automatizar completamente el proceso de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos.<\/p>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n
Figura 1<\/strong>: Representaci\u00f3n esquem\u00e1tica de la configuraci\u00f3n de un ensayo R2-P2 utilizando un KingFisherTM Flex. La configuraci\u00f3n rob\u00f3tica permite la carga de ocho placas de 96 pozos diferentes. Cada placa se puede girar a su posici\u00f3n debajo de un cabezal magn\u00e9tico de 96 pines que cae dentro de la placa de 96 pocillos para liberar, unir o agitar las microesferas magn\u00e9ticas en soluci\u00f3n. En la primera ejecuci\u00f3n rob\u00f3tica, los p\u00e9ptidos se capturan de los lisados mediante perlas magn\u00e9ticas carboxiladas, se purifican y se eluyen mediante digesti\u00f3n a 37 \u00b0C. Los p\u00e9ptidos eluidos se secan y se pueden resuspender para el an\u00e1lisis del proteoma total mediante LC-MS\/MS y\/o para el enriquecimiento autom\u00e1tico de fosfop\u00e9ptidos. Los fosfop\u00e9ptidos se enriquecen mediante una segunda ejecuci\u00f3n rob\u00f3tica en KingFisherTM Flex, utilizando microesferas magn\u00e9ticas de Fe-IMAC, Ti-IMAC, Zr-IMAC o TiO2, y se analizan mediante LC-MS\/MS para obtener el fosfoproteoma. Fuente: Leutert et al. (2019)<\/p>\n\n\n\n<\/div>\n\n\n\n
Superioridad sobre otros m\u00e9todos de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos <\/mark><\/p>\n\n\n\nLeutert et al. compararon tres tipos diferentes de microesferas IMAC (incluida nuestra PureCube Fe-NTA) y microesferas de TiO2. Como se puede ver en la figura 2, nuestras perlas magn\u00e9ticas PureCube Fe-NTA se presentaron como la mejor opci\u00f3n para el enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos. Con nuestras Fe-NTA MagBeads, los fosfop\u00e9ptidos m\u00e1s exclusivos (Fig. 2 A y C) se enriquecieron con la mayor eficiencia (Figura 2 B).<\/p>\n\n\n\nFigura 2:<\/strong> Comparaci\u00f3n del rendimiento del enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos entre cuatro productos\/m\u00e9todos diferentes. A: N\u00famero de fosfop\u00e9ptidos \u00fanicos identificados por los diferentes enriquecimientos (media +\/- SD, n = 3). B: eficiencia de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos mostrada como la fracci\u00f3n de p\u00e9ptidos fosforilados sobre los p\u00e9ptidos totales (media +\/- SD, n = 3). C: Diagrama de Venn de fosfop\u00e9ptidos identificados por los diferentes m\u00e9todos de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos. Fuente: Leutert et al. (2019)<\/p>\n\n\n\n<\/div>\n\n\n\n
El mejor producto por el mejor costo <\/mark><\/p>\n\n\n\nComparar productos de diferentes fabricantes y proveedores puede resultar tedioso. Diferentes concentraciones y vol\u00famenes de diferentes proveedores pueden ser enga\u00f1osos en la b\u00fasqueda de la mejor relaci\u00f3n costo-beneficio. Por lo tanto, en Cube Biotech compilamos los precios de los productos de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos m\u00e1s utilizados para brindar una descripci\u00f3n general de la situaci\u00f3n real de los premios en el mercado.<\/p>\n\n\n\nFigura 3:<\/strong> Cube Biotech no solo ofrece el mejor producto individual para el enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos, sino tambi\u00e9n el m\u00e1s rentable. Los competidores T y G tienen aproximadamente la mitad del volumen de perlas que obtiene por 200 USD en comparaci\u00f3n con Cube Biotech. La diferencia extrema entre el competidor R y Cube Biotech es una proporci\u00f3n de 1:24.<\/p>\n\n\n\n<\/div>\n\n\n\n
FAQ<\/mark><\/p>\n\n\n\n\u2022 \u00bfQu\u00e9 puedo hacer con las perlas de Fe-NTA?<\/strong><\/p>\n\n\n\nR: Se pueden utilizar como matriz para unir y enriquecer as\u00ed los fosfop\u00e9ptidos. <\/p>\n\n\n\n
\u2022 \u00bfC\u00f3mo funciona el proceso de enriquecimiento de fosfop\u00e9ptidos?<\/strong><\/p>\n\n\n\nR: Utilice el protocolo disponible como referencia. <\/p>\n\n\n\n
\u2022 \u00bfPuedo enriquecer todos los fosfop\u00e9ptidos usando Ti-NTA?<\/strong><\/p>\n\n\n\nR: No, esto no es posible. No todos los fosfop\u00e9ptidos se unen a las perlas de Ti-NTA. Como se muestra en la figura 2, se deben usar m\u00faltiples tipos de perlas para cubrir todos los fosfop\u00e9ptidos de una c\u00e9lula. Por eso, tambi\u00e9n ofrecemos perlas de Fe-, Zr- y Al-NTA.<\/p>\n\n\n\n
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