{"id":4515,"date":"2023-02-04T21:12:10","date_gmt":"2023-02-05T03:12:10","guid":{"rendered":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/?post_type=al_product&p=4515"},"modified":"2023-02-05T20:54:27","modified_gmt":"2023-02-06T02:54:27","slug":"screen-quest-colorimetric-elisa-camp-assay-kit","status":"publish","type":"al_product","link":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/productos\/screen-quest-colorimetric-elisa-camp-assay-kit\/","title":{"rendered":"Screen Quest\u2122 Colorimetric ELISA cAMP Assay Kit"},"content":{"rendered":"\n

La adenosina 3′, 5′ monofosfato c\u00edclico (cAMP) es un segundo mensajero importante en la transducci\u00f3n de se\u00f1ales intracelulares. El control de los niveles de AMPc es una de las formas m\u00e1s comunes de detectar agonistas y antagonistas de los GPCR. <\/p>\n\n\n\n

El kit de ensayo de cAMP ELISA colorim\u00e9trico Screen Quest\u2122 se basa en la competencia entre el cAMP marcado con HRP y el cAMP no marcado. HRP-cAMP es desplazado del complejo de anticuerpos HRP-cAMP\/anti-cAMP por cAMP libre no marcado. En ausencia de cAMP, el conjugado HRP-cAMP se une exclusivamente al anticuerpo anti-cAMP. Sin embargo, el cAMP libre no marcado en la muestra de prueba compite por el anticuerpo anti-cAMP con el conjugado de anticuerpo HRP-cAMP, por lo tanto, inhibe la uni\u00f3n de HRP-cAMP al anticuerpo anti-cAMP. <\/p>\n\n\n\n

Nuestro kit de ensayo ELISA cAMP colorim\u00e9trico Screen Quest\u2122 proporciona un m\u00e9todo sensible para detectar la actividad de la adenilato ciclasa en un sistema de ensayo bioqu\u00edmico o basado en c\u00e9lulas. En comparaci\u00f3n con otros kits de ensayo ELISA cAMP, nuestro kit elimina el tedioso paso de acetilaci\u00f3n. El kit utiliza Amplite\u00ae Green como sustrato colorim\u00e9trico para cuantificar la actividad HRP. <\/p>\n\n\n\n

El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulaci\u00f3n de 96 pocillos o de 384 pocillos.<\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n
Catalogo<\/th>Producto<\/th>Presentaci\u00f3n<\/th><\/tr><\/thead>
AAT-36370<\/td>Screen Quest\u2122 Colorimetric ELISA cAMP Assay Kit<\/td>1 placa<\/td><\/tr>
AAT-36371<\/td>Screen Quest\u2122 Colorimetric ELISA cAMP Assay Kit<\/td>10 placas<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n
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\"pdf\"\/<\/figure>\n\n\n\n

SDS<\/a><\/p>\n\n\n\n

\"pdf\"\/<\/figure>\n\n\n\n

Protocol<\/a><\/p>\n<\/div>\n\n\n\n

Importante: Solo para uso en investigaci\u00f3n (RUO). <\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n

Plataforma<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Lector de Microplacas de Absorbancia<\/mark> <\/p>\n\n\n\n

Absorbancia<\/td>405, 650 o 740 nm<\/td><\/tr>
Placa recomendada<\/td>Fondo claro (Componente F)<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

Componentes<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Componente A: cAMP Standard<\/td>1 vial (33 &micro;g)<\/td><\/tr>
Componente B: <\/strong>Buffer de ensayo<\/td>1 botella (20 mL)<\/td><\/tr>
Componente C: HRP-cAMP Conjugate<\/td>1 vial<\/td><\/tr>
Componente D: 10X Wash Solution<\/td>1 botella (10 mL)<\/td><\/tr>
Componente E: Cell Lysis Buffer<\/td>1 botella (10 mL)<\/td><\/tr>
Componente F: Anti-cAMP Ab Coated 96-Well Plate<\/td>1 placa<\/td><\/tr>
Componente G: Amplite&trade; Green<\/td>1 botella (10 mL)<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n
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PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK<\/p>\n\n\n\n

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en al\u00edcuotas de un solo uso y almacenarse a -20 \u00b0C despu\u00e9s de la preparaci\u00f3n. Evite los ciclos repetidos de congelaci\u00f3n y descongelaci\u00f3n.<\/em> <\/p>\n\n\n\n

1. Soluci\u00f3n madre de AMPc (100 \u00b5M)<\/em>: Agregue 1 ml de buffer de ensayo (componente B) al vial de est\u00e1ndar cAMP (componente A). <\/p>\n\n\n\n

2. Soluci\u00f3n madre de conjugado HRP-AMPc (50X)<\/em>: Agregue 55 \u00b5L (cat\u00e1logo 36370) o 550 \u00b5l (cat\u00e1logo 36371) de buffer de ensayo (componente B) en el vial de conjugado HRP-AMPc (componente C). Nota:<\/strong> La soluci\u00f3n madre del conjugado 50X HRP-cAMP sin usar debe dividirse en al\u00edcuotas de un solo uso y almacenarse a -20 o<\/sup>C. <\/p>\n\n\n\n

3. Soluci\u00f3n de lavado (1X)<\/em>: Agregue 1 ml de soluci\u00f3n de lavado 10X (componente D) a 9 ml de agua destilada.<\/p>\n\n\n\n

\n\n\n\n

PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR<\/p>\n\n\n\n

cAMP standard<\/em><\/p>\n\n\n\n

Para su conveniencia use el Planeador Serial de Dilucion:  https:\/\/www.aatbio.com\/tools\/serial-dilution\/36370<\/strong><\/a><\/p>\n\n\n\n

Realice diluciones en serie 1:10, 1:100 y 1:3 de est\u00e1ndares de AMPc en buffer de ensayo (componente B) para obtener AMPc de 10,000, 100, 30, 10, 3, 1, 0.3, 0.1, 0.03, 0.01 y 0.003 nM soluciones diluidas. Conservar en hielo o 4\u00b0C.<\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n
\n\n\n\n

PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO<\/p>\n\n\n\n

Soluci\u00f3n de trabajo del conjugado HRP-cAMP: <\/p>\n\n\n\n

Realice una diluci\u00f3n 1:50 con buffer de ensayo (componente B) para obtener una soluci\u00f3n de trabajo de conjugado HRP-cAMP 1X antes de su uso. Gu\u00e1rdelo en hielo o a 4\u00b0C. Nota: <\/strong>25 \u00b5L de soluci\u00f3n de trabajo de conjugado 1X HRP-cAMP es suficiente para un punto de ensayo; prepare adecuadamente el volumen para un solo uso. <\/p>\n\n\n\n

Para obtener guias sobre la preparaci\u00f3n de muestras de c\u00e9lulas, visite: https:\/\/www.aatbio.com\/resources\/guides\/cell-sample-preparation.html<\/a><\/p>\n\n\n\n

<\/p>\n<\/div><\/div>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n

Imagenes<\/mark><\/p>\n\n\n\n

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Fig. 1<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Figura 1. <\/strong>La respuesta a la dosis de AMPc se midi\u00f3 con el kit de ensayo de AMPc ELISA colorim\u00e9trico Screen Quest\u2122 en una placa transparente de 96 pocillos con un lector de microplacas SpectraMax. La Absorbancia se puede leer a 405 nm (l\u00ednea azul), 650 nm (l\u00ednea roja) o 740 nm (l\u00ednea verde), los datos de la figura B son de la incubaci\u00f3n con Amplite\u00ae Green durante 3 horas.<\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n
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Fig. 2<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Figura 2.<\/strong> La respuesta a la dosis de AMPc se midi\u00f3 con el kit de ensayo de AMPc ELISA colorim\u00e9trico Screen Quest\u2122 en una placa transparente de 96 pocillos con un lector de microplacas SpectraMax. R: El kit puede detectar cAMP tan bajo como 0.1 nM en un volumen de reacci\u00f3n de 100 \u00b5L a 405 nm despu\u00e9s de la incubaci\u00f3n con Amplite\u00ae Green durante 1 hora (l\u00ednea azul) y 3 horas (l\u00ednea roja).<\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n
\"\"
Fig. 3<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n

Figura 3.<\/strong> La reducci\u00f3n de la migraci\u00f3n de BTEC depende del aumento de [cAMP]i. (A) producci\u00f3n de AMPc tras la estimulaci\u00f3n con diferentes agonistas purin\u00e9rgicos o CPA. ATP 100\u2009\u03bcM y otros agonistas purin\u00e9rgicos antimigratorios inducen un fuerte aumento en el nivel de AMPc intracelular despu\u00e9s de 15\u2032 de tratamiento, como se muestra en la tabla A (los datos de al menos tres experimentos independientes se normalizan al control). (B) Los niveles altos de AMPc pueden reducir la migraci\u00f3n de BTEC en el ensayo de cicatrizaci\u00f3n de heridas. Se utilizaron diferentes inductores del aumento de cAMP intracelular: Forskolin 10 \u03bcM (FK), 8-Br-cAMP 500 \u03bcM e IBMX 100 \u03bcM. Los datos se normalizan en CNTRL positivo a las 8 horas y se expresan como media\u2009\u00b1\u2009S.E.M. Prueba de Wilcoxon: *p\u2009<\u20090.001 vs CNTRL; \u00a7p\u2009<\u20090,001 frente a ATP 100\u2009\u03bcM; #p\u2009<\u20090.001. (C,i) Tinci\u00f3n de actina y paxilina en c\u00e9lulas tratadas con FK 10\u2009\u03bcM o no (CNTRL) durante 5\u2032. Las flechas en (C,i) indican la distribuci\u00f3n de los filamentos de actina y se evalu\u00f3 la intensidad de la fluorescencia de la faloidina a lo largo del eje de la c\u00e9lula principal (l\u00edneas blancas en las figuras). Barra de escala\u2009=\u200910\u2009\u03bcm (C,ii) Cuantificaci\u00f3n de la localizaci\u00f3n de actina cortical. (C, iii) Cuantificaci\u00f3n de la densidad de paxilina tras el tratamiento con FK. (C,iv) \u00c1rea total medida para cada condici\u00f3n. Los datos obtenidos de tres experimentos independientes se expresan como media\u2009\u00b1\u2009S.E.M. Prueba de Wilcoxon: *p\u2009<\u20090.001 vs CNTRL. (D) Efecto sobre la migraci\u00f3n de BTEC (cicatrizaci\u00f3n de heridas) de diferentes moduladores de adenilil ciclasa (ddAdo, NaHCO3), activador de EPAC-1 (8-CPT) e inhibidor de PKA (H89). La l\u00ednea punteada representa la inhibici\u00f3n inducida por ATP. Los datos se normalizan en CNTRL positivo a las 8 horas y se expresan como media\u2009\u00b1\u2009S.E.M. Prueba de Wilcoxon: *p\u2009<\u20090.001 vs CNTRL; \u00a7p\u2009<\u20090,001 frente a ATP 100\u2009\u03bcM; #p\u2009<\u20090.001. Fuente: La activaci\u00f3n de los receptores purin\u00e9rgicos P2X7 y P2Y11 inhibe la migraci\u00f3n y normaliza las c\u00e9lulas endoteliales derivadas de tumores a trav\u00e9s de la se\u00f1alizaci\u00f3n de AMPc por Avanzato et al., Scientific Reports, septiembre de 2016.<\/p>\n\n\n\n

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Productos Relacionados<\/mark><\/p>\n\n\n\n

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Bibliograf\u00eda<\/p>\n\n\n\n

Activation of P2X7 and P2Y11 purinergic receptors inhibits migration and normalizes tumor-derived endothelial cells via cAMP signaling<\/a>
Authors: <\/strong>Avanzato, D and Genova, T and Pla, A Fiorio and Bernardini, M and Bianco, S and Bussolati, B and Mancardi, D and Giraudo, E and Maione, F and Cassoni, P and others, undefined
Journal: <\/strong>Scientific Reports (2016)<\/p>\n\n\n\n

The M2 muscarinic receptors are essential for signaling in the heart left ventricle during restraint stress in mice<\/a>
Authors: <\/strong>Tomankova, Hana and Valuskova, Paulina and Varejkova, Eva and Rotkova, Jana and Benes, Jan and Myslivecek, Jaromir
Journal: <\/strong>Stress (2015)<\/p>\n\n\n\n

THE EFFECTS OF RESTRAINT STRESS ON HEART M<\/a>
Authors: <\/strong>Valu{\\v{s}}kov{\\’a}, Paulina and Tomankov{\\’a}, Hana and Rotkov{\\’a}, Jana and Va{\\v{r}}ejkov{\\’a}, Eva and Bene{\\v{s}}, Jan<\/p>\n\n\n\n

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Referencias<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Ver todas las 132 referencias: Citation Explorer<\/a><\/em><\/p>\n\n\n\n

cAMP-Induced Histones H3 Dephosphorylation Is Independent of PKA and MAP Kinase Activations and Correlates With mTOR Inactivation
Authors: <\/strong>Rodriguez P, Rojas J.
Journal: <\/strong>J Cell Biochem (2016): 741<\/p>\n\n\n\n

Changes in the Arabidopsis thaliana Proteome Implicate cAMP in Biotic and Abiotic Stress Responses and Changes in Energy Metabolism
Authors: <\/strong>Alqurashi M, Gehring C, Marondedze C.
Journal: <\/strong>Int J Mol Sci (2016): 852<\/p>\n\n\n\n

Role of the cAMP Pathway in Glucose and Lipid Metabolism
Authors: <\/strong>Ravnskjaer K, Madiraju A, Montminy M.
Journal: <\/strong>Handb Exp Pharmacol (2016): 29<\/p>\n\n\n\n

Odor-induced cAMP production in Drosophila melanogaster olfactory sensory neurons
Authors: <\/strong>Miazzi F, Hansson BS, Wicher D.
Journal: <\/strong>J Exp Biol (2016): 1798<\/p>\n\n\n\n

A cardiac mitochondrial cAMP signaling pathway regulates calcium accumulation, permeability transition and cell death
Authors: <\/strong>Wang Z, Liu D, Varin A, Nicolas V, Courilleau D, Mateo P, Caubere C, Rouet P, Gomez AM, V and ecasteele G, Fischmeister R, Brenner C.
Journal: <\/strong>Cell Death Dis (2016): e2198<\/p>\n\n\n\n

The pleiotropic role of exchange protein directly activated by cAMP 1 (EPAC1) in cancer: implications for therapeutic intervention
Authors: <\/strong>Almahariq M, Mei FC, Cheng X.
Journal: <\/strong>Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) (2016): 75<\/p>\n\n\n\n

A cAMP Biosensor-Based High-Throughput Screening Assay for Identification of Gs-Coupled GPCR Ligands and Phosphodiesterase Inhibitors
Authors: <\/strong>Vedel L, Brauner-Osborne H, Mathiesen JM.
Journal: <\/strong>J Biomol Screen (2015): 849<\/p>\n\n\n\n

Imaging alterations of cardiomyocyte cAMP microdomains in disease
Authors: <\/strong>Froese A, Nikolaev VO.
Journal: <\/strong>Front Pharmacol (2015): 172<\/p>\n\n\n\n

Cardiac Hypertrophy Is Inhibited by a Local Pool of cAMP Regulated by Phosphodiesterase 2
Authors: <\/strong>Zoccarato A, Surdo NC, Aronsen JM, Fields LA, Mancuso L, Dodoni G, Stangherlin A, Livie C, Jiang H, Sin YY, Gesellchen F, Terrin A, Baillie GS, Nicklin SA, Graham D, Szabo-Fresnais N, Krall J, V and eput F, Movsesian M, Furlan L, Corsetti V, Hamilton G, Lefkimmiatis K, Sjaastad I, Zaccolo M.
Journal: <\/strong>Circ Res (2015): 707<\/p>\n\n\n\n

cAMP controls the balance of the propulsive forces generated by the two flagella of Chlamydomonas
Authors: <\/strong>Saegusa Y, Yoshimura K.
Journal: <\/strong>Cytoskeleton (Hoboken) (2015): 412<\/p>\n\n\n\n

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Application Notes (en Ingles)<\/mark><\/p>\n\n\n\n

A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators<\/a>
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies<\/a>
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells<\/a>
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides<\/a>
Annexin V<\/a><\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n

AssayWise (en Ingles)<\/mark><\/p>\n\n\n\n

HRP Antibody Labeling Using Buccutite\u2122 Crosslinking Technology<\/a>
iFluor\u00ae 700 Dyes<\/a>
Hydroxyl Radical Detection<\/a>
Peroxidase Detection<\/a>
Buccutite\u2122 Conjugation Kits: Quick and Easy Antibody Labeling<\/a><\/p>\n\n\n\n

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Este kit de ensayo ELISA cAMP colorim\u00e9trico Screen Quest\u2122 proporciona un m\u00e9todo sensible para detectar la actividad de la adenilato ciclasa en un sistema de ensayo bioqu\u00edmico o basado en c\u00e9lulas. <\/p>\n","protected":false},"featured_media":4518,"template":"","al_product-cat":[34],"aioseo_notices":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/4515"}],"collection":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product"}],"about":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/types\/al_product"}],"version-history":[{"count":6,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/4515\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":4528,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/4515\/revisions\/4528"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/media\/4518"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=4515"}],"wp:term":[{"taxonomy":"al_product-cat","embeddable":true,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product-cat?post=4515"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}