{"id":4087,"date":"2023-01-31T21:35:08","date_gmt":"2023-02-01T03:35:08","guid":{"rendered":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/?post_type=al_product&p=4087"},"modified":"2023-02-01T11:56:02","modified_gmt":"2023-02-01T17:56:02","slug":"phosphoworks-fluorimetric-phosphate-assay-kit-red-fluorescence","status":"publish","type":"al_product","link":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/productos\/phosphoworks-fluorimetric-phosphate-assay-kit-red-fluorescence\/","title":{"rendered":"PhosphoWorks\u2122 Fluorimetric Phosphate Assay Kit *Red Fluorescence*"},"content":{"rendered":"\n

Las c\u00e9lulas utilizan una amplia variedad de \u00e9steres de fosfato (Pi) y polifosfato como sustratos enzim\u00e1ticos, segundos mensajeros, componentes estructurales de la membrana y reservas de energ\u00eda vital. El fosfato est\u00e1 involucrado en muchos procesos biol\u00f3gicos. Por ejemplo, las fosfatasas, las ATPasas y varias otras enzimas catalizan reacciones bioqu\u00edmicas en las que se libera fosfato inorg\u00e1nico de un sustrato de fosfo\u00e9ster. La detecci\u00f3n de muchas enzimas metabolizadoras de fosfo\u00e9steres es dif\u00edcil porque no se dispone de sustratos adecuados. <\/p>\n\n\n\n

Por lo general, ha sido necesario determinar la liberaci\u00f3n de fosfato inorg\u00e1nico mediante ensayos colorim\u00e9tricos tediosos o m\u00e9todos basados en radiois\u00f3topos. Este kit de ensayo de fosfato fluorim\u00e9trico PhosphoWorks\u2122 ha sido desarrollado para medir la actividad de cualquier enzima generadora de Pi utilizando nuestro sensor de fosfato fluorescente rojo. El kit proporciona una detecci\u00f3n sensible de Pi, una alternativa a los m\u00e9todos radiactivos peligrosos y otros ensayos colorim\u00e9tricos menos sensibles. La medici\u00f3n de Pi se basa en el cambio en la absorbancia y la fluorescencia de nuestro nuevo sensor de fosfato. <\/p>\n\n\n\n

Nuestro kit proporciona todos los reactivos esenciales, incluido el sensor de fosfato, los est\u00e1ndares de fosfato y el buffer de ensayo. Se muestra que el ensayo cuantifica el fosfato en soluci\u00f3n a concentraciones de al menos hasta 0,1 \u00b5M. Se puede utilizar para medir la cin\u00e9tica de la liberaci\u00f3n de fosfato de las fosfatasas (como GTPasas y ATPasas) acoplando las dos reacciones enzim\u00e1ticas. <\/p>\n\n\n\n

El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulaci\u00f3n de 96 pocillos o de 384 pocillos y se puede adaptar f\u00e1cilmente a la automatizaci\u00f3n sin necesidad de pasos de separaci\u00f3n.<\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n
Catalogo<\/th>Producto<\/th>Presentaci\u00f3n<\/th><\/tr><\/thead>
AAT-21660<\/td>PhosphoWorks\u2122 Fluorimetric Phosphate Assay Kit *Red Fluorescence*<\/td>125 pruebas<\/td><\/tr>
AAT-21661<\/td>PhosphoWorks\u2122 Fluorimetric Phosphate Assay Kit *Red Fluorescence*<\/td>1250 pruebas<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

\"pdf\"SDS<\/a>\"pdf\"Protocol<\/a><\/p>\n\n\n\n

Importante: Solo para uso en investigaci\u00f3n (RUO). <\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n

Plataforma<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Lector de Microplacas de Fluorescencia<\/mark> <\/p>\n\n\n\n

Excitaci\u00f3n<\/td>540 nm<\/td><\/tr>
Emisi\u00f3n<\/td>590 nm<\/td><\/tr>
Cutoff<\/td>570 nm<\/td><\/tr>
Placa recomendada<\/td>Negra s\u00f3lida <\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
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Componentes<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Componente A: Assay buffer<\/td>10 botellas <\/td><\/tr>
Componente B: Phosphate Sensor <\/td>10 viales (polvo liofilizado)<\/td><\/tr>
Componente C: 1 mM KH2PO4<\/td>1 vial (1 ml)<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n
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PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK<\/p>\n\n\n\n

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en al\u00edcuotas de un solo uso y almacenarse a -20 \u00b0C despu\u00e9s de la preparaci\u00f3n. Evite los ciclos repetidos de congelaci\u00f3n y descongelaci\u00f3n.<\/em><\/p>\n\n\n\n

Soluci\u00f3n madre del sensor de fosfato (125X): <\/em><\/p>\n\n\n\n

Agregue 20 \u00b5L de DMSO en el sensor de fosfato (componente B) para preparar una soluci\u00f3n madre del sensor de fosfato 125X.<\/p>\n\n\n\n

\n\n\n\n

PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR<\/p>\n\n\n\n

Para su conveniencia puede usar el Planificador de diluci\u00f3n en serie: https:\/\/www.aatbio.com\/tools\/serial-dilution\/21660<\/strong><\/a><\/p>\n\n\n\n

Agregue 50 \u03bcl de KH2PO4 1 mM (componente C) en 950 \u03bcl de agua desionizada o buffer de reacci\u00f3n enzim\u00e1tico para obtener una soluci\u00f3n est\u00e1ndar de fosfato 50 \u03bcM (PS7). Tome una soluci\u00f3n est\u00e1ndar de fosfato 50 \u00b5M (PS7) y realice diluciones en serie 1:2 para obtener est\u00e1ndares de fosfato diluidos en serie (PS6 – PS1) con H2O desionizada o buffer de reacci\u00f3n enzim\u00e1tico.<\/p>\n\n\n\n

\n\n\n\n

PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO<\/p>\n\n\n\n

Agregue 20 \u03bcl de soluci\u00f3n madre del sensor de fosfato 125X en 2,5 ml de H2O est\u00e9ril y mezcle bien para obtener una soluci\u00f3n de trabajo del sensor de fosfato. Evite la contaminaci\u00f3n potencial de Pi. Nota<\/strong>: Evite la exposici\u00f3n directa del sensor de fosfato (componente B) a la luz. Debido a la alta sensibilidad de este ensayo a Pi, es extremadamente importante utilizar reactivos y material de laboratorio sin Pi.<\/p>\n\n\n\n

<\/p>\n<\/div><\/div>\n\n\n\n

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Imagen<\/mark><\/p>\n\n\n\n

\"\"<\/figure>\n\n\n\n

Figura 1. <\/strong>La respuesta a la dosis de fosfato se midi\u00f3 con el kit de ensayo de fosfato fluorim\u00e9trico PhosphoWorks\u2122 en una placa negra s\u00f3lida de 96 pocillos utilizando un lector de microplacas Novostar (BMG Labtech).<\/p>\n\n\n\n

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Bibliograf\u00eda<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Pseudomonas aeruginosa Phosphate Transporter PitA (PA4292) Controls Susceptibility to Aminoglycoside Antibiotics by Regulating the Proton Motive Force<\/a>
Authors: <\/strong>Zhao, Xinrui and Jin, Yongxin and Bai, Fang and Cheng, Zhihui and Wu, Weihui and Pan, Xiaolei
Journal: <\/strong>Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2022): e00992–22<\/p>\n\n\n\n

Bladder epithelial cell phosphate transporter inhibition protects mice against uropathogenic Escherichia coli infection<\/a>
Authors: <\/strong>Pang, Yu and Cheng, Zhihui and Zhang, Si and Li, Shujie and Li, Xueping and Li, Xiaodan and Zhang, Xiao and Li, Xiaoxiao and Feng, Yingxing and Cui, Heting and others,
Journal: <\/strong>Cell Reports (2022): 110698<\/p>\n\n\n\n

Sacrificial crystal templating of hyaluronic acid-based hydrogels
Authors: <\/strong>Thomas, Richelle C and Chung, Paul E and Modi, Shan P and Hardy, John G and Schmidt, Christine E
Journal: <\/strong>European Polymer Journal (2017): 487–496<\/p>\n\n\n\n

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Authors: <\/strong>Thomas, Richelle C and Chung, Paul E and Modi, Shan P and Hardy, John G and Schmidt, Christine E
Journal: <\/strong>European Polymer Journal (2016)<\/p>\n\n\n\n

It’s a NO for Bacterial Settlement: Nitric Oxide Regulated Biofilm Formation and Protein Expression<\/a>
Authors: <\/strong>Xu, Yueming
Journal: <\/strong>(2014)<\/p>\n\n\n\n

Osteogenic cell cultures cannot utilize exogenous sources of synthetic polyphosphate for mineralization<\/a>
Authors: <\/strong>Ariganello, Marianne B and Omelon, Sidney and Variola, Fabio and Wazen, Rima M and Moffatt, Pierre and Nanci, Antonio
Journal: <\/strong>Journal of cellular biochemistry (2014): 2089–2102<\/p>\n\n\n\n

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Referencias<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Relationship between activating and editing functions of the adenylation domain of apo-tyrocidin synthetase 1 (apo-TY1)
Authors: <\/strong>Bucevic-Popovic V, Pavela-Vrancic M, Dieckmann R, Von Dohren H.
Journal: <\/strong>Biochimie (2006): 265<\/p>\n\n\n\n

Purine nucleoside phosphorylase activity in rat cerebrospinal fluid
Authors: <\/strong>Silva RG, Santos DS, Basso LA, Oses JP, Wofchuk S, Portela LV, Souza DO.
Journal: <\/strong>Neurochem Res (2004): 1831<\/p>\n\n\n\n

Characterization of the interactions between the small GTPase RhoA and its guanine nucleotide exchange factors
Authors: <\/strong>Tan YC, Wu H, Wang WN, Zheng Y, Wang ZX.
Journal: <\/strong>Anal Biochem (2002): 156<\/p>\n\n\n\n

A continuous spectrophotometric assay for aspartate transcarbamylase and ATPases
Authors: <\/strong>Rieger CE, Lee J, Turnbull JL.
Journal: <\/strong>Anal Biochem (1997): 86<\/p>\n\n\n\n

A spectrophotometric method to measure enzymatic activity in reactions that generate inorganic pyrophosphate
Authors: <\/strong>Upson RH, Haugl and RP, Malekzadeh MN.
Journal: <\/strong>Anal Biochem (1996): 41<\/p>\n\n\n\n

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Kit de ensayo de fosfato fluorim\u00e9trico PhosphoWorks\u2122 *Fluorescencia roja*. Este kit ha sido desarrollado para medir la actividad de cualquier enzima generadora de Pi utilizando nuestro sensor de fosfato fluorescente rojo. <\/p>\n","protected":false},"featured_media":4090,"template":"","al_product-cat":[34],"aioseo_notices":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/4087"}],"collection":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product"}],"about":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/types\/al_product"}],"version-history":[{"count":4,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/4087\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":4092,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/4087\/revisions\/4092"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/media\/4090"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=4087"}],"wp:term":[{"taxonomy":"al_product-cat","embeddable":true,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product-cat?post=4087"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}