{"id":2963,"date":"2023-01-07T13:21:34","date_gmt":"2023-01-07T19:21:34","guid":{"rendered":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/?post_type=al_product&p=2963"},"modified":"2023-01-20T16:53:37","modified_gmt":"2023-01-20T22:53:37","slug":"cell-meter-no-wash-and-probenecid-free-endpoint-calcium-assay-kit","status":"publish","type":"al_product","link":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/productos\/cell-meter-no-wash-and-probenecid-free-endpoint-calcium-assay-kit\/","title":{"rendered":"Cell Meter\u2122 No Wash and Probenecid-Free Endpoint Calcium Assay Kit"},"content":{"rendered":"\n

El kit de ensayo de calcio de punto final sin lavado y sin probenecid Cell Meter\u2122 permite realizar ensayos homog\u00e9neos basados \u200b\u200ben fluorescencia para detectar la movilizaci\u00f3n de calcio intracelular sin necesidad de utilizar el modo de lectura cin\u00e9tica. Se puede usar en lectores de microplacas de fluorescencia con modo de lectura inferior que no tienen un dispensador de l\u00edquido incorporado o la capacidad de lectura cin\u00e9tica. Despu\u00e9s de cargar el colorante Fluo-8E\u2122AM en las c\u00e9lulas de inter\u00e9s, sin pasos de lavado, simplemente se puede agregar el agonista de flujo de calcio mediante un dispensador de l\u00edquido o pipeteo manual, y luego leer la placa con un lector fluorescente. <\/p>\n\n\n\n

Fluo-8E\u2122 AM puede cruzar la membrana celular de forma pasiva por difusi\u00f3n. Una vez dentro de las c\u00e9lulas, los grupos bloqueadores lipof\u00edlicos de Fluo-8E\u2122 AM son escindidos por la esterasa, lo que da como resultado un tinte fluorescente cargado negativamente que permanece dentro de las c\u00e9lulas. Su fluorescencia es muy mejorada y duradera al unirse al calcio. Cuando las c\u00e9lulas que expresan GPCR de inter\u00e9s se estimulan con un agonista, el receptor se\u00f1ala la liberaci\u00f3n de calcio intracelular, lo que aumenta significativamente la fluorescencia de Fluo-8E\u2122. Las caracter\u00edsticas de su alta sensibilidad, >100 veces mejora  la fluorescencia y la se\u00f1al fluorescente de larga duraci\u00f3n hacen de Fluo-8E\u2122 un indicador ideal para la medici\u00f3n de calcio celular en lectores de microplacas de fluorescencia que no tienen la capacidad del modo de lectura cin\u00e9tica y transferencia de fluidos. <\/p>\n\n\n\n

El kit de ensayo de calcio de punto final sin lavado y sin probenecid Cell Meter\u2122 se puede realizar en un formato de placa de microtitulaci\u00f3n de 96 pozos o de 384 pozos. <\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n
Catalogo<\/th>Producto<\/th>Presentaci\u00f3n<\/th><\/tr><\/thead>
AAT-36312<\/td>Cell Meter\u2122 No Wash and Probenecid-Free Endpoint Calcium Assay Kit<\/td>100 pruebas<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n
\n
\"pdf\"\/<\/figure>\n\n\n\n

SDS<\/a><\/p>\n\n\n\n

\"pdf\"\/<\/figure>\n\n\n\n

Protocol<\/a><\/p>\n<\/div>\n\n\n\n

Importante: Solo para uso en investigaci\u00f3n (RUO). <\/p>\n\n\n\n

<\/div>\n\n\n\n

Plataforma<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Lector de Microplacas de Flourescencia <\/mark><\/p>\n\n\n\n

Excitaci\u00f3n<\/td>490 nm<\/td><\/tr>
Emisi\u00f3n<\/td>525 nm<\/td><\/tr>
Cutoff<\/td>515 nm<\/td><\/tr>
Placa recomendada<\/td>Paredes negras, fondo claro<\/td><\/tr>
Especificaciones instrumento<\/td>Modo de lectura inferior<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

<\/p>\n\n\n\n

Componentes<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Componente A: Fluo-8E\u2122 AM<\/td>2 viales, liofilizado<\/td><\/tr>
Componente B: 10X Pluronic\u00ae F127 Plus<\/td>1 botella (1 ml)<\/td><\/tr>
Componente C: HHBS (Hanks\u2019 with 20 mM Hepes)<\/td>1 botella (20 ml)<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

Espectro<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Abrir en Advanced Spectrum Viewer<\/a><\/em><\/p>\n\n\n\n

\"\"<\/figure>\n\n\n\n

Propiedades espectrales<\/mark><\/p>\n\n\n\n

Factor de correcci\u00f3n (260 nm)<\/td>1.076<\/td><\/tr>
Factor de correcci\u00f3n (280 nm)<\/td>0.769<\/td><\/tr>
Coeficiente de extinci\u00f3n (cm -1<\/sup> M -1<\/sup>)<\/td>23430<\/td><\/tr>
Excitaci\u00f3n (nm)<\/td>495<\/td><\/tr>
Emisi\u00f3n (nm)<\/td>516<\/td><\/tr>
Rendimiento cu\u00e1ntico<\/td>0.161<\/sup><\/td><\/tr><\/tbody><\/table>
1<\/sup> Calcium bound (pH 7.2)<\/figcaption><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK<\/p>\n\n\n\n

\n

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en al\u00edcuotas de un solo uso y almacenarse a -20 \u00b0C despu\u00e9s de la preparaci\u00f3n. Evite los ciclos repetidos de congelaci\u00f3n y descongelaci\u00f3n.<\/em><\/p>\n\n\n\n

  1. Soluci\u00f3n madre Fluo-8E\u2122 AM:<\/em>
    Agregue 10 \u00b5L de DMSO en el vial de Fluo-8E\u2122 AM (Componente A) y mezcle bien. Nota: 10 \u00b5L de soluci\u00f3n madre Fluo-8E\u2122 AM es suficiente para 50 ensayos (la mitad de la placa de 96 pocillos). Nota: La soluci\u00f3n madre de Fluo-8E\u2122 AM sin usar puede dividirse en al\u00edcuotas y almacenarse a < -20 o<\/sup>C durante m\u00e1s de un mes si los tubos est\u00e1n sellados herm\u00e9ticamente. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelaci\u00f3n-descongelaci\u00f3n.<\/li>
  2. Buffer de ensayo (1X):<\/em>
    Agregue 9 mL de HHBS (Componente C) en 10X Pluronic\u00ae F127 Plus (1 mL, Componente B) y mezcle bien. Nota: 10 ml de buffer de ensayo (1X) son suficientes para una placa. Haga al\u00edcuotas y almacene el buffer de ensayo 1X no utilizado a < -20 \u00b0C. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelaci\u00f3n-descongelaci\u00f3n.<\/li><\/ol>\n<\/div><\/div>\n\n\n\n
    \n\n\n\n

    PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO<\/p>\n\n\n\n

    \n

    Soluci\u00f3n de carga de tinte Fluo-8E\u2122 AM:<\/em>
    Agregue 10 \u00b5L de soluci\u00f3n madre Fluo-8E\u2122 AM en 5 mL de Tamp\u00f3n de ensayo (1X) y m\u00e9zclelos bien. Nota: Esta soluci\u00f3n de trabajo es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.<\/p>\n\n\n\n

    Para obtener pautas sobre la preparaci\u00f3n de muestras de c\u00e9lulas, visite<\/p>\n\n\n\n

    https:\/\/www.aatbio.com\/resources\/guides\/cell-sample-preparation.html<\/a><\/p>\n<\/div><\/div>\n\n\n\n

    <\/div>\n\n\n\n

    Imagen<\/mark><\/p>\n\n\n\n

    \"\"<\/figure>\n\n\n\n

    Figura 1.<\/strong> La liberaci\u00f3n de calcio intracelular dependiente de la dosis de ATP se midi\u00f3 con el kit de ensayo de calcio de punto final sin lavado y sin probenecid Cell Meter\u2122 en c\u00e9lulas CHO-K1 en una placa de 96  pozos. Se incubaron 3 columnas de c\u00e9lulas con soluci\u00f3n de carga de colorante Fluo-8E\u2122 AM durante 1 hora a 37 \u00b0C antes de agregar ATP a las 3 columnas de los pozos. La placa se ley\u00f3 inmediatamente despu\u00e9s de la adici\u00f3n de ATP por ClarioStar (BMG Labtech) a Ex\/Em = 490\/525 nm con modo de lectura de punto final y de fondo.<\/p>\n\n\n\n

    <\/div>\n\n\n\n

    Productos Relacionados<\/mark><\/p>\n\n\n\n

    Cell Meter\u2122 Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence*<\/a><\/td><\/tr>
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    <\/div>\n\n\n\n

    Bibliograf\u00eda<\/mark><\/mark><\/mark><\/p>\n\n\n\n

    $\\beta$-Arrestin 2 and ERK1\/2 Are Important Mediators Engaged in Close Cooperation between TRPV1 and $\\mu$-Opioid Receptors in the Plasma Membrane<\/a>
    Authors: <\/strong>Melkes, Barbora and Markova, Vendula and Hejnova, Lucie and Novotny, Jiri
    Journal: <\/strong>International Journal of Molecular Sciences (2020): 4626<\/p>\n\n\n\n

    Naloxone Is a Potential Binding Ligand and Activator of the Capsaicin Receptor TRPV1<\/a>
    Authors: <\/strong>Melkes, Barbora and Markova, Vendula and Hejnova, Lucie and Marek, Ales and Novotny, Jiri
    Journal: <\/strong>Biological and Pharmaceutical Bulletin (2020): 908–912<\/p>\n\n\n\n

    Studies on molecular interactions of the mu-opioid and TRPV1 receptors<\/a>
    Authors: <\/strong>Melkes, Barbora
    Journal: <\/strong>(2020)<\/p>\n\n\n\n

    <\/div>\n\n\n\n

    Referencias<\/mark><\/p>\n\n\n\n

    Ver todas las 34 referencias: <\/em>Citation Explorer<\/a><\/p>\n\n\n\n

    Fluorescence absorbance inner-filter decomposition: the role of emission shape on estimates of free Ca(2+) using Rhod-2
    Authors: <\/strong>Territo PR, Heil J, Bose S, Evans FJ, Balaban RS.
    Journal: <\/strong>Appl Spectrosc (2007): 138<\/p>\n\n\n\n

    Protein kinase C and myocardial calcium handling during ischemia and reperfusion: lessons learned using Rhod-2 spectrofluorometry
    Authors: <\/strong>Stamm C, del Nido PJ.
    Journal: <\/strong>Thorac Cardiovasc Surg (2004): 127<\/p>\n\n\n\n

    Novel fluo-4 analogs for fluorescent calcium measurements
    Authors: <\/strong>Martin VV, Beierlein M, Morgan JL, Rothe A, Gee KR.
    Journal: <\/strong>Cell Calcium (2004): 509<\/p>\n\n\n\n

    Kinetic characterization of novel NR2B antagonists using fluorescence detection of calcium flux
    Authors: <\/strong>Bednar B, Cunningham ME, Kiss L, Cheng G, McCauley JA, Liverton NJ, Koblan KS.
    Journal: <\/strong>J Neurosci Methods (2004): 247<\/p>\n\n\n\n

    Cytosolic calcium in the ischemic rabbit heart: assessment by pH- and temperature-adjusted rhod-2 spectrofluorometry
    Authors: <\/strong>Stamm C, Friehs I, Choi YH, Zurakowski D, McGowan FX, del Nido PJ.
    Journal: <\/strong>Cardiovasc Res (2003): 695<\/p>\n\n\n\n

    Calcium measurements in perfused mouse heart: quantitating fluorescence and absorbance of Rhod-2 by application of photon migration theory
    Authors: <\/strong>Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
    Journal: <\/strong>Biophys J (2001): 549<\/p>\n\n\n\n

    Calibration of the calcium dissociation constant of Rhod(2)in the perfused mouse heart using manganese quenching
    Authors: <\/strong>Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
    Journal: <\/strong>Cell Calcium (2001): 217<\/p>\n\n\n\n

    Changes in mitochondrial Ca2+ detected with Rhod-2 in single frog and mouse skeletal muscle fibres during and after repeated tetanic contractions
    Authors: <\/strong>Lannergren J, Westerblad H, Bruton JD.
    Journal: <\/strong>J Muscle Res Cell Motil (2001): 265<\/p>\n\n\n\n

    Rhod-2 based measurements of intracellular calcium in the perfused mouse heart: cellular and subcellular localization and response to positive inotropy
    Authors: <\/strong>MacGowan GA, Du C, Glonty V, Suhan JP, Koretsky AP, Farkas DL.
    Journal: <\/strong>J Biomed Opt (2001): 23<\/p>\n\n\n\n

    Mitochondrial free calcium levels (Rhod-2 fluorescence) and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death
    Authors: <\/strong>Muriel MP, Lambeng N, Darios F, Michel PP, Hirsch EC, Agid Y, Ruberg M.
    Journal: <\/strong>J Comp Neurol (2000): 297<\/p>\n\n\n\n

    <\/div>\n\n\n\n

    Application Notes (en Ingles)<\/mark><\/p>\n\n\n\n

    A Comparison of Fluorescent Red Calcium Indicators for Detecting Intracellular Calcium Mobilization in CHO Cells<\/a>
    A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators<\/a>
    A New Red Fluorescent & Robust Screen Quest\u2122 Rhod-4\u2122 Ca2+Indicator for Screening GPCR & Ca2+ Channel Targets<\/a>
    A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets<\/a>
    A Novel NO Wash Probeniceid-Free Calcium Assay for Functional Analysis of GPCR and Calcium Channel Targets<\/a><\/p>\n\n\n\n

    <\/div>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    Kit de ensayo de calcio de punto final sin lavado y sin probenecid Cell Meter\u2122, Esta optimizado para uso en lector de microplacas y permite realizar ensayos homog\u00e9neos basados en fluorescencia para detectar la movilizaci\u00f3n de calcio intracelular sin necesidad de utilizar el modo de lectura cin\u00e9tica.<\/p>\n","protected":false},"featured_media":2965,"template":"","al_product-cat":[34],"aioseo_notices":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/2963"}],"collection":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product"}],"about":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/types\/al_product"}],"version-history":[{"count":13,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/2963\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":3608,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product\/2963\/revisions\/3608"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/media\/2965"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=2963"}],"wp:term":[{"taxonomy":"al_product-cat","embeddable":true,"href":"https:\/\/nuevo22.cidsamexico.com\/index.php\/wp-json\/wp\/v2\/al_product-cat?post=2963"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}