Kit de ensayo TR-FRET cAMP sin lavado, Screen Quest™. Nuestro kit proporciona un método de ensayo conveniente para monitorear la activación de la adenilil ciclasa en sistemas de receptores acoplados a proteína G.
Descripción
Nuestro kit de ensayo cAMP Screen Quest™ TR-FRET sin lavado proporciona un método de ensayo conveniente para monitorear la activación de la adenilil ciclasa en sistemas de receptores acoplados a proteína G. En comparación con otros kits de ensayo de ELISA comerciales de cAMP,
Este ensayo se basa en la competencia por fijar un numero de anticuerpos anti-cAMP al sitio de unión entre el cAMP marcado con trFLour 650 y el cAMP libre no marcado. El anticuerpo anti-cAMP esta marcado con trFluor™ Eu mientras que el cAMP esta marcado con trFluor™ 650. En ausencia de cAMP, el cAMP conjugado con trFluor™ 650 esta unido al anticuerpo anti-cAMP trFluor™ Eu para tener una fuerte señal FRET. Mientras que el cAMP libre esta presente en la muestra, este compite por el sitio de unión del anticuerpo anti-cAMP marcado con trFluor™ Eu , por lo tanto, inhibe la unión de trFluor™ 650-cAMP al anticuerpo anti-cAMP. El AMPc marcado con trFluor™ 650 solo tiene una vidamedia útil de fluorescencia de nanosegundos, mientras que el marcador de AMPc fluorescente unido a anticuerpo anti-cAMP marcado con Eu TR Fluor™ tiene una vidamedia útil de fluorescencia mucho más larga que un fluoróforo de lantánido. La magnitud de la señal de fluorescencia resuelta tiempo-respuesta (TR-FRET) es proporcional a la concentración de cAMP en una muestra.
El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos, y es conveniente para monitorear la actividad de AMPc con ultraespecificidad y sensibilidad en sistemas de receptores acoplados a proteína G.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36379 | Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMP Assay Kit | 1 placa |
| AAT-36380 | Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMP Assay Kit | 10 placas |
| AAT-36381 | Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMP Assay Kit | 50 placas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Placa recomendada | Negra sólida y/o Negra con fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Timed-resolved |
Componentes
| Componente A: Anti cAMP-trFluor™ Eu | 5 vial |
| Componente B: cAMP-trFluor™ 650 | 5 vial |
| Componente C: cAMP Standard | 1 vial (33 µg) |
| Componente D: Cell Lysis Buffer | 5 bottle (100 mL) |
| Componente E: Diluent | 5 bottle (100 mL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Estándar de AMPc (1 mM)
Agregue 100 µL de diluyente (componente E) al estándar cAMP (componente C) y mezcle bien.
Nota: El estándar de AMPc no utilizado puede dividirse en alícuotas y almacenarse a -20 °C.
PREPARACION DE SOLUCION DE ESTANDAR
Para su conveniencia puede usar el Planificador de dilución en serie: https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/36379
Estándar de AMPc
La solución madre 1 mM se puede diluir a 11200 nM seguido de diluciones 4X.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
- Solución de trabajo Anti cAMP-trFluor™ Eu
Agregue 50 μl de solución (componente A) a 2.5 ml de buffer de lisis celular (componente D).
Nota: Realice la preparación justo antes de su uso y según sea necesario. - Solución de trabajo cAMP-trFluor™ 650
Agregue 50 μl de solución (componente B) a 2.5 ml de buffer de lisis celular (componente D).
Nota: Realice la preparación justo antes de su uso y según sea necesario.
Bibliografía
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Referencias
Ver todas las 132 referencias: Citation Explorer
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Application Notes (en Ingles)
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Protein Crosslinking Method for Labeling and Modifying Antibodies
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
Annexin V