Kit de ensayo cAMP ELISA fluorimétrico Mod. Screen Quest™
Descripción
Nuestro Kit Screen Quest™ Fluorescence ELISA cAMP proporciona un método de ensayo optimizado para monitorear la activación de la ciclasa de adenilato en sistemas de receptores acoplados a proteína G.
El ensayo se basa en la competencia por el numero de anticuerpos unidos a sitios entre la cAMP marcada con HRP y cAMP no marcada. HRP-cAMP es desplazado por el complejo HRP-cAMP/anti-cAMP por cAMP libre no marcado. En ausencia de cAMP conjugada esta unida al anticuerpo anti-cAMP exclusivamente. Por lo tanto, la cAMP libre sin marca en la muestra compite por el anticuerpo anti-cAMP marcado con HRP, Por lo tanto, inhibe la unión de HRP-cAMP al anticuerpo anti-cAMP.
Nuestro kit de ensayo de AMPc fluorométrico Screen Quest™ proporciona un método sensible para detectar la actividad de la adenilato ciclasa. En comparación con otros kits de ensayo ELISA cAMP comerciales, este kit de ensayo cAMP solo requiere un único paso de lavado para eliminar el material no unido antes del paso de desarrollo. También elimina el tedioso paso de acetilación.
El kit utiliza Amplite® Red como sustrato fluorogénico de HRP para cuantificar la actividad de HRP. El producto fluorescente formado es proporcional a la actividad del conjugado HRP-AMPc. Kit Disponible con 1 placa o 10 placas
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36373 | Screen Quest™ Fluorimetric ELISA cAMP Assay Kit | 1 placas |
| AAT-36374 | Screen Quest™ Fluorimetric ELISA cAMP Assay Kit | 10 placas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa recomendada | Negra sólida (componente H) |
Componentes
| Componente A: cAMP Standard | 1 vial (33 µg) |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (20 mL) |
| Componente C: HRP-cAMP Conjugate | 1 vial |
| Componente D: 10X Wash Solution | 1 botella (10 mL) |
| Componente E: Cell Lysis Buffer | 1 botella (10 mL) |
| Componente F: 3% H2O2 | 1 vial (50 µL) |
| Componente G: Amplite™ Red | 1 vial |
| Componente H: Anti-cAMP Ab Coated 96-Well Plate | 1 placa |
| Componente I: Substrate Buffer | 1 botella (10 mL) |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 571 |
| Emisión (nm) | 584 |
PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre de AMPc (100 µM)
Agregue 1 ml de buffer de ensayo (componente B) al vial de estándar cAMP (componente A).
Nota La solución madre de AMPc no utilizada (100 µM) debe dividirse en alícuotas y almacenarse a -20 °C. - Solución madre de conjugado HRP-cAMP (50X)
Agregue 55 µl (catálogo 36373) o 550 µl (catálogo 36374) de buffer de ensayo (componente B) en el vial de conjugado HRP-AMPc (componente C).
Nota La solución madre de conjugado 50X HRP-AMPc no utilizada debe dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C. - Solución de lavado (1X)
Agregue 1 ml de solución de lavado 10X (componente D) a 9 ml de agua destilada. - Solución madre de Amplite™ Red (200X)
Agregue 50 µL (Cat. # 36373) o 500 µL (Cat. # 36374) de DMSO al vial de Amplite™ Red (Componente G). Tenga en cuenta que 0,5 µL de solución madre 200X Amplite™ Red es suficiente para un punto de ensayo. La solución madre reconstituida no utilizada debe dividirse en alícuotas y almacenarse a -20 °C.
PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR
Para mayor conveniencia puede utilizar el Planificador de dilución en serie:
https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/36373
Estándar de AMPc
Realice diluciones en serie 1:10, 1:100 y 1:3 de estándares de AMPc en buffer de ensayo (componente B) para obtener AMPc de 10 000, 100, 30, 10, 3, 1, 0.3, 0.1, 0.03, 0.01 y 0.003 nM soluciones diluidas. Conservar en hielo o en refrigeración a 4°C.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
- Solución de trabajo del conjugado HRP-cAMP
Realice una dilución 1:50 con buffer de ensayo (componente B) para obtener una solución de trabajo de conjugado HRP-cAMP 1X antes de iniciar. Almacenar a 4°C.
Tenga en cuenta que 25 µL de solución de trabajo de conjugado 1X HRP-cAMP son suficientes para un punto de ensayo; prepare adecuadamente el volumen para un solo uso. - Solución de trabajo Amplite™ Red
Agregue 50 µL de solución madre Amplite™ Red (200X) y 11,5 µL de H2O2 al 3% (Componente F) en 10 mL de Substrate Buffer (Componente I).
Nota: La solución de trabajo Amplite™ Red no es estable, utilícela de inmediato.
Para una guia sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagen
Figura 1. La respuesta a la dosis de AMPc se midió con el kit de ensayo de AMPc ELISA fluorimétrico Screen Quest™ en una placa negra sólida de 96 pozos con un lector de microplacas Gemini.
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Bibliografía
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Abbreviation of Common Chemical Compounds Related to Peptides
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