Kit de ensayo de medio para eliminacion de calcio Screen Quest™ Fluo-8. Optimizado para lineas celulares dificiles. Este kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Fluo-8 NW proporciona un ensayo homogéneo basado en fluorescencia para detectar la movilización de calcio intracelular.
Descripción
Los ensayos de flujo de calcio son métodos preferidos en el descubrimiento de fármacos para la detección de receptores acoplados a proteína G (GPCR). El kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Fluo-8 NW proporciona un ensayo homogéneo basado en fluorescencia para detectar la movilización de calcio intracelular. Las células que expresan un GPCR de interés que emite señales a través del calcio están precargadas con nuestro Fluo-8 NW patentado que puede atravesar la membrana celular.
Fluo-8 NW es el indicador de calcio más brillante disponible para la detección de HTS. Una vez dentro de la célula, los grupos bloqueadores lipofílicos de Fluo-8 NW son escindidos por la esterasa celular no específica, lo que da como resultado un tinte fluorescente con carga negativa que permanece dentro de las células y su fluorescencia aumenta considerablemente al unirse al calcio. Cuando las células se estimulan con compuestos de detección, el receptor señala la liberación de calcio intracelular, lo que aumenta en gran medida la fluorescencia de Fluo-8 NW. Las características de su longitud de onda larga, alta sensibilidad y aumento de fluorescencia de 100 a 250 veces (cuando forma complejos con calcio) hacen de Fluo-8 NW un indicador ideal para la medición de calcio celular.
Este kit de ensayo de calcio Screen Quest Fluo-8 NW proporciona un método de ensayo optimizado para monitorear los receptores acoplados a proteína G (GPCR) y los canales de calcio. El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos y se puede adaptar fácilmente a la automatización. Se vende en Kit de 1, 10 y 100 placas.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36307 | Screen Quest™ Fluo-8 Medium Removal Calcium Assay Kit *Optimized for Difficult Cell Lines* | 1 placa |
| AAT-36308 | Screen Quest™ Fluo-8 Medium Removal Calcium Assay Kit *Optimized for Difficult Cell Lines* | 10 placas |
| AAT-36309 | Screen Quest™ Fluo-8 Medium Removal Calcium Assay Kit *Optimized for Difficult Cell Lines* | 100 placas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 510 nm |
| Placa recomendada | Pared negra / fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior/Manejo de líquidos programable |
Componentes
| Componente A: Fluo-8 NW | 10 viales liofilizados |
| Componente B: 10X Pluronic® F127 Plus | 10 botellas (10 mL/botella) |
| Componente C: HHBS (Hanks’ buffer con 20 mM Hepes) | No Incluido |
Otros Instrumentos
ArrayScan, FDSS, FLIPR, FlexStation, IN Cell Analyzer, NOVOStar, ViewLux
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades espectrales
| Factor de corrección (260 nm) | 1.076 |
| Factor de corrección (280 nm) | 0.769 |
| Coeficiente de Extinción (cm -1 M -1) | 23430 |
| Excitación (nm) | 495 |
| Emisión (nm) | 516 |
| Rendimiento cuántico | 0.161 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
1. Solución madre Fluo-8 NW:
Para Cat No. 36307, agregue 10 µl de DMSO en Fluo-8 NW (componente A) y mézclelos bien.
Para Cat No. 36308 y 36309, agregue 100 µL de DMSO en Fluo-8 NW (Componente A) y mezcle bien. Nota: 10 μL de solución madre Fluo-8 NW es suficiente para 1 placa.
2. Solución madre de buffer de ensayo (1X):
Para los números de catálogo 36307 y 36308, agregue 9 ml de HHBS (componente C) en 10X Pluronic® F127 Plus (1 ml, componente B) y mezcle bien.
Para Cat No. 36309, agregue el frasco completo de 10X Pluronic® F127 Plus (10 ml, componente B) en 90 ml de buufer HHBS (no incluido en el kit) y mezcle bien. Nota: 10 ml de buffer de ensayo 1X son suficientes para una placa.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 10 µl de solución madre de Fluo-8 NW DMSO a 10 ml de Buffer de ensayo 1X y mezcle bien. Esta solución de trabajo es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Para guia sobre la preparación de muestras de células, visite:
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagen
Figura 1. La respuesta a la dosis de carbacol se midió en células HEK-293 con el kit de ensayo Screen Quest™ Fluo-8 NW y el kit de ensayo Fluo-4 NW. Se sembraron células HEK-293 40.000 células/100 µl/pozo, durante la noche a en una placa de 96 pozos Costar de pared negra/fondo transparente. Se eliminó el medio de crecimiento y las células se incubaron con 100 µl de solución de carga de colorante utilizando el kit de ensayo de calcio Screen Quest™ Fluo 8-NW o el kit Fluo-4 NW (según las instrucciones del fabricante) durante 1 hora a temperatura ambiente. NOVOstar (BMG Labtech) añadió carbacol (25 µl/pozo) para alcanzar las concentraciones finales indicadas. La EC50 de Carbacol usando Fluo8 NW es de aproximadamente 1,2 µM.
Bibliografía
Ver todas las 158 bibliografías: Citation Explorer
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L-Type Calcium Channel Inhibition Contributes to the Proarrhythmic Effects of Aconitine in Human Cardiomyocytes
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Referencias
Ver todas las 26 referencias: Citation Explorer
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Application Notes (en Ingles)
A Comparison of Fluorescent Red Calcium Indicators for Detecting Intracellular Calcium Mobilization in CHO Cells
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
A New Red Fluorescent & Robust Screen Quest™ Rhod-4™ Ca2+Indicator for Screening GPCR & Ca2+ Channel Targets
A New Robust No-Wash FLIPR Calcium Assay Kit for Screening GPCR and Calcium Channel Targets
A Novel NO Wash Probeniceid-Free Calcium Assay for Functional Analysis of GPCR and Calcium Channel Targets