Kit de ensayo colorimétrico de captación de glucosa Screen Quest™
Descripción
Los sistemas de transporte de glucosa son responsables de transportar la glucosa a través de las membranas celulares. La medición de la absorción de 2-desoxiglucosa (2-DG), un análogo de la glucosa, en tejidos y células es ampliamente aceptada como un método confiable para estimar la cantidad de glucosa absorbida e investigar la regulación del metabolismo de la glucosa y el mecanismo de resistencia a la insulina. La captación de 2-DG se determina comúnmente mediante el uso de 2-DG no metabolizado marcado con tritio o C14. Sin embargo, el uso rutinario de una sonda radiomarcada es costoso y requiere un tedioso procedimiento de manipulación especial.
El kit de ensayo colorimétrico de captación de glucosa Screen Quest™ de AAT Bioquest proporciona un ensayo sensible y no radiactivo en tejidos o células cultivadas. En este ensayo, los transportadores de glucosa captan el 2-DG y lo metabolizan a 2-DG-6-fosfato (2-DG6P). El 2-DG6P no metabolizable se acumula en las células y es proporcional a la absorción de glucosa por las células. El 2-DG6P acumulado se oxida enzimáticamente y genera NADPH, que es monitoreado específicamente por un sensor de NADPH cromogénico. La señal se puede leer con un lector de microplacas de absorción leyendo la proporción de OD a una longitud de onda de 570 nm a 610 nm.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36503 | Screen Quest™ Colorimetric Glucose Uptake Assay Kit | 100 pruebas |
| AAT-36504 | Screen Quest™ Colorimetric Glucose Uptake Assay Kit | 500 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Absorbancia
| Absorbancia | 570/610 nm |
| Placa recomendada | Fondo claro |
Componentes
| Componente A: 2-Deoxyglucose (2-DG, 10mM) | 1 botella (5 mL) |
| Componente B: Glucose Uptake Buffer | 1 botella (50 mL) |
| Componente C: Acidic Lysis Buffer | 1 botella (12.5 mL) |
| Componente D: Neutralization Buffer | 1 botella (12.5 mL) |
| Componente E: Enzyme Probe | 5 botellas (polvo liofilizado) |
| Componente F: Assay Buffer | 1 botella (25 mL) |
| Componente G: NADP | 1 viales |
| Componente H: 5x KRPH Buffer | 1 botella (100 mL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre de buffer KRPH (1X):
Agregue 20 ml de buffer KRPH (5X) (componente H) a 80 ml de agua desionizada y mezcle bien. Nota: un volumen de 50 ml de buffer KRPH 1× es suficiente para aproximadamente una placa de 96 pocillos. Prepare el volumen necesario proporcionalmente. Guarde el 1×KRPH no utilizado a 4oC o -20oC.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Solución de trabajo NADP: Agregue 100 µL de H2O en el vial de NADP (Componente G) y mezcle bien.
Solución de trabajo de sonda enzimática: Agregue 5 ml de buffer de ensayo (componente F) a la botella de sonda enzimática (componente E) y mézclelos bien.
Solución de trabajo del ensayo de captación de 2 DG: Agregue 100 µL de solución de trabajo de NADP a la solución de trabajo de Enzyme Probe y mézclelos bien. Nota: estas cantidades son buenas para una placa de 96 pocillos.
Imagen
Figura 1. Medición de la captación de 2DG en adipocitos 3T3-L1 diferenciados y fibroblastos 3T3-L1. Los ensayos se realizaron con el kit de ensayo de captación de glucosa colorimétrica Screen Quest™ en una placa de lisina Poly-D de cultivo celular de pared negra/fondo transparente utilizando un lector de microplacas SpectraMax (Molecular Devices). (A: control negativo, sin insulina, sin tratamiento con 2DG. B: captación de 2DG en ausencia de insulina. C: captación de 2DG en presencia de insulina 1 mM. D: captación de 2DG en presencia de insulina 1 mM y floretina 200 mM. E: captación de 2DG en presencia de insulina 1 mM y D-glucosa 5 mM.)
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Referencias
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