Las tinciones de Hoechst son una familia de tinciones fluorescentes para marcar ADN en microscopía de fluorescencia.
Descripción
Las tinciones de Hoechst son una familia de tinciones fluorescentes para marcar ADN en microscopía de fluorescencia. Debido a que estas tinciones fluorescentes marcan el ADN, también se usan comúnmente para visualizar núcleos y mitocondrias. Dos de estas bis-benzimidas estrechamente relacionadas se usan comúnmente: Hoechst 33258 y Hoechst 33342. Ambos tintes se excitan con luz ultravioleta a alrededor de 350 nm y ambos emiten luz de fluorescencia azul/cian alrededor de un máximo de emisión a 461 nm. Las tinciones de Hoechst se pueden usar en células vivas o fijadas y, a menudo, se usan como sustituto de otra tinción de ácido nucleico, DAPI. La diferencia clave entre ellos es que el grupo etilo adicional de Hoechst 33342 lo hace más lipofílico y, por lo tanto, más capaz de atravesar las membranas celulares intactas. En algunas aplicaciones, Hoechst 33258 es significativamente menos permeable. Estos tintes también se pueden usar para detectar el contenido de una muestra de ADN trazando una curva estándar de emisión a contenido.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-17530 | Hoechst 33342 *Ultrapure Grade* | 100 mg |
| AAT-17533 | Hoechst 33342 *Ultrapure Grade* | 1 g |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelación (< -15 °C). Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Microscopio de fluorescencia
Excitación : 350 nm
Emisión : 461 nm
Placa recomendada : Negro sólido, fondo transparente
Propiedades fisicas
| Peso Molecular | 561.93 |
| Disolvente | AGUA |
Espectro
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Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 352 |
| Emisión (nm) | 454 |
Calculadora
Preparación de la solución de stock común
Volumen de agua necesario para reconstituir la masa específica de Hoechst 33342 *Grado ultrapuro* a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 177.958 µL | 889.791 µL | 1.78 mL | 8.898 mL | 17.796 mL |
| 5 mM | 35.592 µL | 177.958 µL | 355.916 µL | 1.78 mL | 3.559 mL |
| 10 mM | 17.796 µL | 88.979 µL | 177.958 µL | 889.791 µL | 1.78 mL |
Imagenes
Figura 1. Las células HeLa se incubaron en tampón HBSS 1X con suero al 5 % para inducir la inanición. Después de la inanición, las células se trataron con la solución de trabajo Autophagy Green™ (Cat No. 23002) durante 20 minutos en una incubadora a 37 °C, CO2 al 5 % y luego se lavaron 3 veces. Los núcleos se etiquetaron con Hoechst 33342 (Cat No. 17530). Los lisosomas se marcaron con LysoBrite™ Orange (Cat No. 22657).
Figura 2. Se sembraron células HeLa en microplacas de 96 pocillos y se incubaron a 37 °C, CO2 al 5 % durante 24 horas. A continuación, las células se tiñeron con Hoechst 33342 5 o 10 µM durante 30 minutos a 37 °C, se lavaron y se tomaron imágenes en un microscopio Keyence BZ-X. Posteriormente, las células se fijaron con formaldehído al 4 % durante 20 minutos a temperatura ambiente, se lavaron y se tomaron imágenes.
Figura 3. Flujo de trabajo para el ensayo de detección de muerte celular “tres en uno”. Las HUVEC que crecen en la placa de 96 pocillos durante 48 horas se exponen a las NP durante 24 horas. Se evalúan simultáneamente tres tipos de muerte celular. A) La necrosis celular se mide espectrofotométricamente después de mezclar una alícuota de sobrenadante celular con sustrato LDH. B) La viabilidad celular se evalúa añadiendo sustrato WST-8 a las células. Después de tres horas de incubación, se transfieren alícuotas de la mezcla de reacción a la nueva placa y se miden espectrofotométricamente. C) La apoptosis celular se detecta tras incubar las células con Hoechst 33342 y fijarlas con paraformaldehído. Las imágenes capturadas bajo el microscopio de fluorescencia invertida se procesan computacionalmente con la macro ImageJ especialmente diseñada. Fuente: Un ensayo de detección eficaz “tres en uno” para probar la toxicidad de fármacos y nanopartículas en células endoteliales humanas por Marcela Filipova et al., PLOS, octubre de 2018.
Figura 4. Toxicidad de respuesta temporal de diferentes NP hacia HUVEC según lo medido por el ensayo CDS. Los HUVEC en la placa de 96 pocillos se trataron con 100 μg/ml de SPION, SiNP y CNTCOOH NP durante 0–24 h. La viabilidad celular se midió mediante el ensayo WST-8 (A), la necrosis celular se determinó mediante el ensayo LDH (B) y el software ImageJ contó el número de núcleos celulares intactos (C) y el número de cuerpos apoptóticos (D) después de las células se tiñeron con Hoechst 33342. Cada tratamiento se realizó en 6 plicados y los resultados (n = 3) se expresan como las medias ± SEM según se analizó mediante ANOVA unidireccional seguido de la prueba de Dunnett. ***P<0,001, **P<0,01 y *P<0,05, frente al punto de tiempo de 0 horas. Fuente: Un ensayo de detección eficaz “tres en uno” para probar la toxicidad de fármacos y nanopartículas en células endoteliales humanas por Marcela Filipova et al., PLOS, octubre de 2018.
Bibliografía
Ver todas las 30 bibliografías: Citation Explorer
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Referencias
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Role of topoisomerases in cytotoxicity induced by DNA ligand Hoechst-33342 and UV-C in a glioma cell line
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Application Notes (en Ingles)
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
FITC (Fluorescein isothiocyanate)
Fluorescein isothiocyanate (FITC)
A Novel Fluorescent Probe for Imaging and Detecting Hydroxyl Radical in Living Cells
FITC (Fluorescein isothiocyanate)