Kit de ensayo de actividad de superóxido mitocondrial fluorimétrico Cell Meter™ esta optimizado para uso en lectores de microplacas y utiliza nuestro exclusivo indicador de superóxido para cuantificar el nivel de superóxido en células vivas.
Descripción
Las mitocondrias son los principales productores de superóxido celular. La producción de superóxido baja a moderada es fundamental para la regulación adecuada de muchos procesos celulares esenciales, incluida la expresión génica, la transducción de señales y la adaptación muscular al entrenamiento de ejercicios de resistencia. La producción descontrolada de superóxido mitocondrial puede desencadenar un daño oxidativo celular que contribuye a la patogenia de una amplia variedad de trastornos, como el cáncer, las enfermedades cardiovasculares, las enfermedades neurodegenerativas y el envejecimiento. La detección de superóxido mitocondrial intracelular es de importancia central para comprender la regulación celular redox adecuada y el impacto de su desregulación en diversas patologías.
El kit de ensayo de actividad de superóxido mitocondrial fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro exclusivo indicador de superóxido para cuantificar el nivel de superóxido en células vivas. MitoROS™ 580 es permeable a las células vivas y puede dirigirse rápida y selectivamente al superóxido en las mitocondrias. Genera fluorescencia roja cuando reacciona con superóxido. El kit de detección de superóxido intracelular fluorimétrico Cell Meter™ proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar superóxido mitocondrial en células vivas con una hora de incubación. Este kit se puede utilizar en lectores de microplacas de fluorescencia y aplicaciones de microscopía de fluorescencia.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22971 | Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cutoff | 570 nm |
| Placa recomendada | Pared negra, fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior |
Componentes
| Componente A: MitoROS™ 580 | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (20 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre de MitoROS™ 580 (500X): Agregue 50 µL de DMSO (Componente C) en el vial de MitoROS™ 580 (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de MitoROS™ 580 500X. Proteger de la luz. Nota: 25 µL de solución madre 500X MitoROS™ 580 es suficiente para 1 placa. Para el almacenamiento, selle los tubos herméticamente.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 25 μL de solución madre de MitoROS™ 580 500X en 10 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo de MitoROS™ 580. Nota: Esta solución de trabajo MitoROS™ 580 es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Para obtener guia sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Imágenes de fluorescencia de la medición de superóxido en células HeLa utilizando el kit de detección de superóxido intracelular fluorimétrico Cell Meter™ (n.° de catálogo 22971). Se colocaron 100 µl de Cell Meter en 100.000 células HeLa/pozo/ incubando durante la noche en una placa de fondo transparente/pared negra de 96 pozos[mp1] . Tratamiento con AMA: las células se trataron con antimicina A (AMA) 50 µM a 37 °C durante 30 minutos y luego se incubaron con MitoROS™ 580 durante 1 hora. Control no tratado: las células HeLa se incubaron con MitoROS™ 580 a 37 °C durante 1 hora sin tratamiento con AMA. La señal de fluorescencia se midió utilizando un microscopio de fluorescencia con un filtro TRITC.
Figura 2. Detección de superóxido intracelular en células HeLa utilizando el kit de detección de superóxido intracelular fluorimétrico Cell Meter™ (Cat#22971). Se sembraron células HeLa a 100.000 células/pocillo/100 µl durante la noche en una placa de fondo transparente/pared negra de 96 pocillos. Las células se incubaron con piocianina (Pyo) 50 µM; Antimicina A (AMA) 50 µM o sin tratamiento (Control) a 37 ºC durante 30 minutos. A continuación, las células se incubaron con MitoROS™ 580 a 37 ºC durante 1 hora. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 540/590 nm (corte = 570 nm) con modo de lectura inferior utilizando un lector de microplacas CLARIOstar (BMG Labtech).
Productos Alternativos
| Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit *Green Fluorescence* |
| Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit*Optimized for Flow Cytometry* |
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Bibliografía
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Referencias
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