Kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorométrico Cell Meter™ *Fluorescencia verde*, El kit utiliza nuestro exclusivo sensor de ROS para cuantificar ROS en células vivas.
Descripción
Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo normal del oxígeno y juegan un papel importante en la señalización celular. Sin embargo, durante los estados relacionados con el estrés oxidativo, los niveles de ROS pueden aumentar drásticamente. La acumulación de ROS da como resultado un daño significativo a las estructuras celulares. El papel del estrés oxidativo en las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la osteoporosis, los accidentes cerebrovasculares, las enfermedades inflamatorias, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el cáncer ha sido bien establecido. La medición de ROS ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.
El kit de ensayo de ROS fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro exclusivo sensor de ROS para cuantificar ROS en células vivas. ROS Green es permeable a las células. Genera la fluorescencia verde cuando reacciona con ROS. El kit es un formato de ensayo optimizado de “mezclar y leer” que es compatible con los instrumentos de manejo de líquidos HTS. El kit de ROS fluorimétrico Cell Meter™ proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelular en células vivas con una hora de incubación.
El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos y se puede adaptar fácilmente a la automatización sin un paso de separación. Su señal se puede leer fácilmente utilizando un lector de microplacas de fluorescencia o un microscopio de fluorescencia.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22900 | Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit*Green Fluorescence* | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | Filtro FITC |
| Emisión | Filtro FITC |
| Placa recomendada | Pared negra, fondo claro |
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 515 nm |
| Placa recomendada | Pared negra, fondo claro |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior |
Componentes
| Componente A: Amplite™ ROS Green | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (20 mL) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (200 µL) |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución madre Amplite™ ROS Green (500X):
Agregue 40 µL de DMSO (Componente C) en el vial de Amplite™ ROS Green (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de Amplite™ ROS Green 500X. Proteger de la luz. Nota: 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Green es suficiente para 1 placa. Para el almacenamiento, selle los tubos herméticamente.
PREPARACION DE SOLUCION DE TRABAJO
Agregue 20 µL de solución madre 500X Amplite™ ROS Green en 10 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo Amplite™ ROS Green. Nota: Esta solución de trabajo Amplite™ ROS Green es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Para obtener pautas sobre la preparación de muestras de células, visite
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. . Imagenes de fluorescencia para la detecccion simultanea de oxido nitrico (NO) y ROS total en macrófagos RAW 264.7. Las células fueron co-teñidas con Nitrixyte™ Orange (Red) y Amplite® ROS Green (Green). Las células fueron tratadas 20µg/ml de lipopolisacárido (LPS), 1mM L-arginina (L-Arg) y 50µM piocianina (Pyo ) y células control sin tratamiento, ambas incubadas a 37°C por 16 horas . La señal de la fluorescencia fue cuantificada usando un microscopio de fluoresencia equipado con TRIC (Nitrixyte™ Orange, Red) y FITC (Amplite® ROS Green, Green) simultáneamente.
Figura 2. Detección de ROS en células Jurkat con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™. Se sembraron células Jurkat el mismo día a 300.000 células/100 µl/pocillo en una placa de 96 pocillos Costar de pared negra/fondo transparente. Se añadió la solución de carga del ensayo de ROS (100 µl/pocillo) y se incubó en una incubadora CO2 a 37 °C al 5 % durante 1 hora. Y luego las células se trataron con H2O2 1 mM, 0,1 mM o sin H2O2 durante 30 minutos. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 490/525 nm (corte a 515 nm) con el modo de lectura inferior utilizando FlexStation (Molecular Devices).
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Bibliografía
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Referencias
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