Kit de ensayo para la actividad total de ROS intracelular fluorométrico *florecencia rojo profundo*
Descripción
Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo normal del oxígeno y juegan un papel importante en la señalización celular. La acumulación de ROS da como resultado un daño significativo a las estructuras celulares. El papel del estrés oxidativo en las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, la osteoporosis, los accidentes cerebrovasculares, las enfermedades inflamatorias, una serie de enfermedades neurodegenerativas y el cáncer ha sido bien establecido. La medición de ROS ayudará a determinar cómo el estrés oxidativo modula diversas vías intracelulares.
El kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ utiliza nuestro sensor patentado ROS Brite™ 670 para cuantificar ROS en células vivas. El ROS Brite™ 670, permeable a las células y no fluorescente, exhibe una fuerte señal de fluorescencia al reaccionar con ROS. El sensor ROS Brite™ 670 está localizado en el citoplasma. La señal de fluorescencia del sensor ROS Brite™ 670 se puede medir mediante microscopía de fluorescencia, imágenes de alto contenido, fluorometría de microplaca o citometría de flujo.
El kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ proporciona un ensayo fluorimétrico sensible de un solo paso para detectar ROS intracelulares (especialmente superóxido y radical hidroxilo) en células vivas dentro de 1 hora de incubación. El ensayo se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pocillos o de 384 pozos utilizando un lector de microplacas de fluorescencia o un microscopio de fluorescencia con filtro Cy5.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22903 | Cell Meter™ Fluorimetric Intracellular Total ROS Activity Assay Kit | 200 ensayos |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 650 nm |
| Emisión | 675 nm |
| Corte | 665 nm |
| Placa Recomendada | Paredes negras / fondo claro |
| Especificaciones Instrumento | Modo de lectura inferior |
Citómetro de flujo
| Excitación Laser | 640 nm |
| Emisión Filtro | 660/20 nm |
| Especificaciones Instrumento | Canal APC |
Microscopio de Flourescencia
| Excitación | Juego de Filtros Cy5 |
| Emisión | Juego de Filtros Cy5 |
| Especificaciones Instrumento | Paredes negras / fondo claro |
Componentes
| Componente A: ROS Brite™ 670 | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (20ml) |
| Componente C: DMSO | 1 vial (100 µL) |
Preparación de Solución de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre ROS Brite™ 670 (500X)
Agregue 40 µL de DMSO (Componente C) en el vial de ROS Brite™ 670 (Componente A) y mezcle bien para preparar una solución madre de 500X ROS Brite™ 670. Proteger de la luz.
Nota: Tenga en cuenta que 20 µL de solución madre 500X ROS Brite™ 670 es suficiente para 1 placa. Para el citómetro de flujo y para mayor comodidad, la solución madre 500X ROS Brite™ 670 se puede diluir por 5 a 100X en DMSO. Para el almacenamiento, selle los tubos herméticamente.
Preparación de Solución de Trabajo
Agregue 20 µl de solución madre 500X ROS Brite™ 670 en 10 ml de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo ROS Brite™ 670.
Nota: Esta solución de trabajo ROS Brite™ 670 es estable durante al menos 2 horas a temperatura ambiente.
Preparación de células
Para guias sobre la preparación de muestras de células, visite https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
Imagenes
Figura 1. Detección de ROS en células HeLa con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™. Se sembraron 15.000 células HeLa durante la noche con /90 µl pozo en una placa de 96 pocillos Costar de pared negra/fondo transparente. Las células control no se trataron o se trataron con 100 µM H2O2 a 1 mM o hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) durante 30 minutos a 37 °C. Se añadió la solución de trabajo ROS Brite™ 670 (100 µl/ pozo) y se incubó en una incubadora a 37 °C con CO2 al 5 % durante 1 hora. La señal de fluorescencia se controló a Ex/Em = 650/675 nm (corte = 665 nm) con el modo de lectura inferior utilizando FlexStation (Molecular Devices).
Figura 2. Imágenes de células Hela teñidas con el kit de ensayo de actividad de ROS total intracelular fluorimétrico Cell Meter™ en una placa de 96 pocillos de pared negra/fondo transparente Costar. A: Células control no tratadas. B: Células tratadas con 100 µM de hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) durante 30 minutos antes de la tinción.
Figura 3. Detección de ROS en células Jurkat. Las células Jurkat se trataron sin (verde) o con 100 µM hidroperóxido de terc-butilo (TBHP) (rojo) durante 30 minutos a 37 °C y luego se cargaron con ROS Brite™ 670 en una incubadora CO2 al 5 %, a 37 °C durante 1 hora. Las intensidades de fluorescencia se midieron con el canal APC utilizando un citómetro de flujo (NovoCyte 3000, ACEA).
Formatos Alternativos
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Bibliografía
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Referencias
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