Kit de ensayo de calcio por citometría de flujo, Cell Meter™ Este kit proporciona ensayos basados en fluorescencia para detectar la movilización de calcio intracelular mediante un citómetro de flujo.
Descripción
El kit de ensayo de calcio por citométria de flujo Cell Meter™ proporciona ensayos basados en fluorescencia para detectar la movilización de calcio intracelular mediante un citómetro de flujo. Se puede utilizar para lectura cinética o para lectura de punto final.
Después de cargar el colorante Calbryte™ 520 AM en las células de interés, simplemente lave las células y agregue el agonista de flujo de calcio, luego puede leer la muestra a través de un citómetro de flujo usando el modo de lectura cinética o el modo de lectura de punto final. Calbryte™ 520 AM puede cruzar la membrana celular de forma pasiva por difusión. Una vez dentro de las células, los grupos bloqueadores lipofílicos de Calbryte™ 520 AM son escindidos por la esterasa, lo que da como resultado un tinte fluorescente cargado negativamente que permanece dentro de las células. Su fluorescencia aumenta mucho al unirse al calcio. Cuando las células que expresan GPCR de interés se estimulan con un agonista, el receptor señala la liberación de calcio intracelular, lo que aumenta significativamente la fluorescencia de Calbryte™ 520.
El kit de ensayo de calcio por citometría de flujo Cell Meter™ se puede utilizar para monitorear el flujo de calcio celular y clasificar las células.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-36310 | Cell Meter™ Flow Cytometric Calcium Assay Kit | 100 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Citómetro de Flujo
| Excitación laser | 488 nm |
| Filtro de Emisión | 530/30 nm |
| Especificaciones instrumento | Canal FITC |
Otros instrumentos: ArrayScan, FDSS, FlexStation, IN Cell Analyzer, NOVOStar, ViewLux
Componentes
| Componente A: Calbryte™ 520 AM | 1 vial, liofilizado |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (50 ml) |
| Componente C: HHBS Probenecid (Opcional) | 1 botella (10 mL, 25mM) |
| Componente D: HHBS (Hanks’ con 20 mM Hepes) | 1 botella (100 mL) |
Espectro
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Propiedades espectrales
| Excitación (nm) | 493 |
| Emisión (nm) | 515 |
| Rendimiento cuántico | 0.751 |
PREPARACION DE SOLUCION DE STOCK
Calbryte™ 520 AM solución madre (500X):
Agregue 100 µl de DMSO (no incluido) en el vial de solución madre Calbryte™ 520 AM (componente A) y mézclelos bien. Nota: 100 µL de solución madre Calbryte™ 520 AM es suficiente para 100 ensayos. La solución madre de Calbryte™ 520 AM sin usar se puede dividir en alícuotas y almacenar a < -20 °C durante más de un mes si los tubos están sellados herméticamente. Proteger de la luz y evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación.
Imagenes
Figura 1. La liberación de calcio intracelular inducida por ATP se midió con el kit de ensayo de calcio para citométria de flujo Cell Meter™ en células CHO-K1. Las células se incubaron con colorante Calbryte™ 520 AM durante 30 min a 37 °C antes de añadir ATP 10 µM a las células. Se adquirió la línea de base y el resto de las células se analizaron después de la adición de ATP. La respuesta se midió a lo largo del tiempo. El análisis se realizó en el citómetro de flujo NovoCyte™ 3000. Las flechas en el gráfico indican el tiempo (30 segundos) entre la adición de ATP y el análisis real.
Figura 2. La liberación de calcio intracelular dependiente de la dosis de ATP se midió con el kit de ensayo de calcio citométrico de flujo Cell Meter™ en células CHO-K1. Las células se incubaron con colorante Calbryte™ 520 AM durante 30 min a 37 °C antes de agregar ATP a las células. Se adquirió la línea de base y el resto de las células se analizaron después de la adición de ATP. La respuesta se midió a lo largo del tiempo. El análisis se realizó en el citómetro de flujo NovoCyte™ 3000. A. Se añadieron ATP 10 µM, 1 µM o 0 µM a las células. Las flechas en el gráfico indican el tiempo (30 segundos) entre la adición de ATP y el análisis real. B. Cambios dependientes del tiempo de la señal fluorescente.
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Bibliografía
Inhibition of P110$\alpha$ and P110$\delta$ catalytic subunits of PI3 kinase reverses impaired arterial healing after injury in hypercholesterolemic male mice
Authors: Chaudhuri, Pinaki and Smith, Andrew H and Graham, Linda M and Rosenbaum, Michael A
Journal: American Journal of Physiology-Cell Physiology (2021): C943–C955
Referencias
Ver todas las 34 referencias: Citation Explorer
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Application Notes (en Ingles)
A Comparison of Fluorescent Red Calcium Indicators for Detecting Intracellular Calcium Mobilization in CHO Cells
A Meta-Analysis of Common Calcium Indicators
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