Calceina AM Grado Ultrapuro *CAS 148504-34-1*. En comparación con otros reactivos del marcado de células vivas (como BCECF-AM y diacetato de carboxifluoresceína), la calceína-AM es la sonda fluorescente más adecuada para teñir células viables debido a su baja citotoxicidad.
Descripción
La calceína AM pasa fácilmente a través de la membrana celular de las células viables debido a su mayor hidrofobicidad en comparación con la calceína. El derivado de acetometoxi (AM) de la calceína (calceína AM) se usa ampliamente para marcar células vivas, ya que puede transportarse a través de la membrana celular hacia las células vivas. Los grupos éster AM enmascaran la parte de la molécula que quela el calcio. Al transportarse a las células vivas, las esterasas celulares cortan los grupos AM, la molécula se une al calcio dentro de la célula (lo que resulta en la adquisición de una fuerte fluorescencia verde) y queda atrapada en el interior. Como las células muertas carecen de esterasas, solo se marcan las células vivas. Esta característica lo hace muy útil para probar la viabilidad celular y para el marcado de células a corto plazo.
En comparación con otros reactivos de marcado de células vivas (como BCECF-AM y diacetato de carboxifluoresceína), la calceína-AM es la sonda fluorescente más adecuada para teñir células viables debido a su baja citotoxicidad. La calceína no afecta significativamente las funciones celulares como la proliferación o la quimiotaxis de los linfocitos. Además, los ensayos de viabilidad que utilizan calceína son fiables y se correlacionan bien con el ensayo estándar de liberación de 51Cr.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-22003 | Calcein, AM *UltraPure grade* | 1 mg |
| AAT-22004 | Calcein, AM *UltraPure grade* | 20 x 50 ug |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelar (< -15 °C), Minimizar la exposición a la luz
Plataforma
Citómetro de Flujo
| Excitación Laser | 488 nm |
| Emisión Filtro | 530/30 nm |
| Especificaciones Instrumento | Canal FITC |
Microscopio de Fluorescencia
| Excitación | Juego de filtros FITC |
| Emisión | Juego de filtros FITC |
| Placa recomendada | Pared negra/fondo transparente |
Lector de Microplacas de Fluorescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Corte | 515 nm |
| Placa Recomendada | Pared negra/fondo transparente |
| Especificaciones instrumento | Modo de lectura inferior |
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Coeficiente de extinción (cm -1 M -1) | 81000 |
| Excitación (nm) | 501 |
| Emisión (nm) | 521 |
Preparacion de solucion madre
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Calceína, AM UltraPure grade solución madre
Prepare una solución madre de calceína AM de 2 a 5 mM en DMSO anhidro de alta calidad.
Nota: El detergente no iónico Pluronic® F-127 se puede utilizar para aumentar la solubilidad acuosa de los ésteres AM. En el buffer de tinción, la concentración final de Pluronic® F-127 debe ser de aproximadamente 0,02 %. Se puede comprar una variedad de productos Pluronic® F-127 de AAT Bioquest. Evite el almacenamiento a largo plazo de esters AM en presencia de Pluronic® F-127.
Preparación de solución de trabajo
Calceína, AM UltraPure grade solución de trabajo
Prepare una solución de trabajo de calceína AM de 1 a 10 µM en el buffer de su elección (p. ej., buffer Hanks y Hepes). Para la mayoría de las líneas celulares, se recomienda calceína AM en la concentración final de 4 a 5 µM. La concentración exacta de indicadores necesarios para la carga de células debe determinarse empíricamente.
Nota: Si sus células contienen transportadores de aniones orgánicos, se puede agregar probenecid (1–2,5 mM) o sulfinpirazona (0,1–0,25 mM) a la solución de trabajo para reducir las fugas de los indicadores desesterificados.
Calculadora
Preparación de la solución de stock común
Tabla 1. Volumen de DMSO necesario para reconstituir la masa específica de calceína, AM Grado ultrapuro CAS 148504-34-1 a la concentración dada. Tenga en cuenta que el volumen es solo para preparar la solución madre. Consulte el protocolo experimental de muestra para conocer los buffers experimentales/fisiológicos apropiados.
| 0.1 mg | 0.5 mg | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 100.517 µL | 502.583 µL | 1.005 mL | 5.026 mL | 10.052 mL |
| 5 mM | 20.103 µL | 100.517 µL | 201.033 µL | 1.005 mL | 2.01 mL |
| 10 mM | 10.052 µL | 50.258 µL | 100.517 µL | 502.583 µL | 1.005 mL |
Imagenes
Figura 1. Imágenes simultáneas de células HeLa vivas y apoptóticas marcadas con calceína AM (n.º de cat. 22003) y conjugado de anexina V-iFluor® 647 (n.º de cat. 20074)
Figura 2. Imágenes de células HeLa Vivas teñidas con Calceína, AM (Cat.22003).
Figura 3. Estructura quimica para Calcein, AM *UltraPure grade* *CAS 148504-34-1*
Formato Alternativo
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Bibliografía
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Referencias
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Application Notes (en Ingles)
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Annexin V
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