Amplite® Red

Amplite® Red es una de las sondas fluorogénicas más sensibles y estables para detectar HRP y H2O2.

Descripción

Nuestro Amplite® Red es un sustrato de peroxidasa fluorogénica sensible que genera un producto fluorescente muy rojo que tiene una absorción máxima de 571 nm y una emisión máxima de 585 nm.

A diferencia de otros sustratos de HRP, como las dihidrofluoresceínas y las dihidrorodaminas, la oxidación por aire de Amplite® Red es mínima. Amplite® Red es una de las sondas fluorogénicas más sensibles y estables para detectar HRP y H2O2. Amplite® Red se ha utilizado ampliamente para detectar HRP en muchos inmunoensayos. Por otro lado, Amplite® Red también se puede utilizar para detectar trazas de H2O2. La detección de H2O2 basada en Amplite® Red es al menos un orden de magnitud más sensible que el ensayo de escopoletina comúnmente usado para H2O2.

Debido a que el H2O2 se produce en muchas reacciones enzimáticas redox, Amplite® Red puede usarse en reacciones enzimáticas acopladas para detectar la actividad de muchas oxidasas y/o enzimas/sustratos o cofactores relacionados, como glucosa, acetilcolina y colesterol, L-glutamato, aminoácidos , etc.

CatalogoProductoPresentación
AAT-11011Amplite® Red AAT Bioquest1000 Ensayos

Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelación a <-15 °C. Minimizar la exposición a la luz.

Plataforma

Lector de Microplacas de Flourescencia

Excitación540 nm
Emisión590 nm
Cuttoff550 nm
Placa recomendada Placa negra

Espectro

Abrir en Advanced Spectrum Viewer

Propiedades Espectrales

Excitación (nm)571
Emisión (nm)584

Preparación de Soluciones de Stock

A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.

Solución madre de AmpliteTM Red (250X):
Agregue 200 ml de DMSO anhidro en el vial y mezcle bien. La solución madre debe usarse con prontitud. Cualquier solución no utilizada debe dividirse en alícuotas y volver a congelarse a < -20 oC. Nota: Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación y protéjalo de la luz.


Preparación de Soluciones de Trabajo

  1. Solución de trabajo de peroxidasa roja AmpliteTM (1X):
    Agregue 20 μL de solución madre AmpliteTM Red (250X) en 5 mL de buffer de fosfato 50 mM o el buffer de su elección, pH 7 con H2O2 200 mM. Nota: AmpliteTM Red es inestable en presencia de tioles como DTT y b-mercaptoetanol. Los tioles superiores a 10 μM (concentración final) podrían disminuir significativamente el rango dinámico del ensayo. El NADH y el glutatión (reducido de: GSH) pueden interferir con el ensayo
  2. Solución de trabajo AmpliteTM Red H2O2 (1X):
    Agregue 20 μL de solución madre AmpliteTM Red (250X) en 5 mL de buffer de fosfato 50 mM o el buffer de su elección, pH 7 con 0,4 unidades/mL de peroxidasa. Nota: AmpliteTM Red es inestable en presencia de tioles como DTT y b-mercaptoetanol. Los tioles superiores a 10 μM (concentración final) podrían disminuir significativamente el rango dinámico del ensayo. El NADH y el glutatión (reducido de: GSH) pueden interferir con el ensayo.

Imagenes

Figura 1. La respuesta a la dosis de HRP se midió con el kit de ensayo de peroxidasa fluorimétrica Amplite® en una placa negra utilizando un lector de microplacas de fluorescencia Gemini (Molecular Devices).

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Bibliografía

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Referencias

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FAQ

Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?

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