Kit de ensayo de cuantificación de tiol total fluorimétrico Amplite® *Fluorescencia verde*. Nuestro kit proporciona un ensayo fluorométrico ultrasensible para cuantificar los tioles que existen en una molécula pequeña.
Descripción
La detección y medición de tiol libre (como cisteína libre, glutatión y residuos de cisteína en proteínas) es una de las tareas esenciales para investigar procesos y eventos biológicos en muchos sistemas biológicos. El seguimiento del glutatión reducido (GSH) y oxidado en muestras biológicas es esencial para evaluar el estado redox y de desintoxicación de células y tejidos en relación con el papel protector del glutatión frente a la lesión celular oxidativa y mediada por radicales libres.
Los trastornos del metabolismo de la cisteína incluyen la cistinosis, una enfermedad autosómica recesiva producida por un defecto en el transporte lisosomal, y la cistinuria, un trastorno hereditario común del transporte de aminoácidos. Hay pocos reactivos o kits de ensayo disponibles para cuantificar tioles en sistemas biológicos. Sin embargo, todos los kits comerciales carecen de sensibilidad o tienen protocolos tediosos.
Nuestro kit de determinación de tioles totales fluorimétricos Amplite® proporciona un ensayo fluorométrico ultrasensible para cuantificar los tioles que existen en una molécula pequeña. El kit utiliza un tinte no fluorescente patentado que se vuelve fuertemente fluorescente al reaccionar con el tiol. El kit proporciona un método fluorométrico sensible de un solo paso para detectar tan solo 1 picomol de cisteína o GSH en un volumen de ensayo de 100 µL (concentración de 10 nM).
El ensayo es rápido y robusto. Se puede realizar en un conveniente formato de placa de microtitulación de 96 pozos o de 384 pozos y se puede adaptar fácilmente a la automatización. Para la cuantificación rápida de grupos tiol en una proteína, le recomendamos que utilice nuestro kit catálogo 5529 que está optimizado para cuantificar tioles de proteínas.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-5524 | Amplite® Fluorimetric Total Thiol Quantitation Assay Kit *Green Fluorescence* | 200 pruebas |
Importante: Solo para uso en investigación (RUO).
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 490 nm |
| Emisión | 525 nm |
| Cutoff | 515 nm |
| Placa recomendada | Negra sólida |
Componentes
| Componente A: Thiolite™ Green | 1 vial |
| Componente B: Buffer de ensayo | 1 botella (25 mL) |
| Componente C: GSH Standard | 1 vial (62 µg) |
| Componente D: DMSO | 1 vial (400 µL) |
Espectro
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Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 510 |
| Emisión (nm) | 525 |
PREPARACION DE SOLUCIONES DE STOCK
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
- Solución estándar de GSH (1 mM)
Agregue 200 µL de ddH2O en el vial de GSH Standard (Componente C) para preparar una solución estándar de GSH de 1 mM (1 nmol/µL). - Solución madre de Thiolite™ Green (100X)
Agregue 100 µL de DMSO (Componente D) en el vial de Thiolite™ Green (Componente A) para preparar una solución madre de Thiolite™ Green 100X.
Nota Alternativamente, si se observa precipitación mientras se prepara la solución de trabajo, se puede preparar una solución madre 50X usando 200 µL de solución de DMSO.
PREPARACION DE SOLUCION ESTANDAR
Para su conveniencia puede utilizar el Planificador de dilución en serie:
https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/5524
Estándar GSH
Agregue 30 μL de solución estándar de GSH de 1 mM (1 nmol/μL) a 970 μL de buffer de ensayo (componente B) para generar una solución estándar de GSH de 30 μM (30 pmol/μL). Tome una solución estándar de GSH de 30 μM (30 pmol/μL) y realice diluciones en serie 1:3 para obtener estándares de GSH diluidos en serie (SD7-SD1) con buffer de ensayo (componente B). Nota: La solución estándar de GSH diluida es inestable. Úselo dentro de las primeras 4 horas.
PREPARACION DE SOLUCIONES DE TRABAJO
Agregue 50 μL de solución madre de Thiolite™ Green 100X en 5 mL de buffer de ensayo (componente B) y mezcle bien para preparar la solución de trabajo de GSH.
Nota: Esta solución de trabajo de GSH es suficiente para una placa de 96 pocillos. Es inestable a temperatura ambiente y se debe usar dentro de las primeras 2 horas. Evite la exposición a la luz.
Nota: Como alternativa, se puede preparar una solución de trabajo de GSH agregando una solución madre de Thiolite™ Green 100X con buffer de ensayo (componente B) proporcionalmente.
Nota Si se observa precipitación con este protocolo, se puede realizar una dilución 50X (consulte la nota en la solución madre (2)) y usar 100 µL de solución madre 50X Thiolite™ Green en 5 mL de ubber de ensayo (componente B).
Imagen
Figura 1. Las respuestas a la dosis de GSH y cisteína se midieron en una placa negra sólida de 96 pozos con el kit de ensayo de cuantificación de tiol fluorimétrico Amplite® usando un lector de microplacas NOVOstar (BMG Labtech).
Bibliografía
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Referencias
Ver todas las 26 referencias: Citation Explorer
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Application Notes (en Ingles)
A Library of Well-Defined and Water-Soluble Poly(alkyl phosphonate)s with Adjustable Hydrolysis
Acetylcholinesterase Inhibitory Activity of Pigment Echinochrome A
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