Cell-free E.coli lysate
Descripción
Nuestros lisados libres de células de E.coli son la maquinaria de purificación de proteínas aisladas de células bacterianas. Crean un sistema de expresión de proteínas libre de células ajustable y de alto rendimiento. Las ventajas de la expresión de proteínas libres de células son numerosas, entre otras cosas, permite a un científico:
• Para la estabilización directa y la integración cotraduccional de proteínas de membrana en nanodiscos.
• Expresión de proteínas que de otro modo serían tóxicas
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| CU-21001 | Cell-free E.coli lysate-45 | 350 µl |
| CU-21011 | Cell-free E.coli lysate HighYield | 350 µl |
| CU-21033 | Cell-free E.coli lysate HighYield-T7 | 4 x 330 µl |
Datasheet a petición, ya que son específicas del lote.
| FEATURE | |
|---|---|
| State | Polvo liofilizado para disolver en agua |
| Peso Molecular | 10-11 kDa |
| Buffer | HEPES |
| pH after solving | 7.5 |
| Divalent cationic tolerance | 6 mM |
| Acrylic Acid to Styrene Ratio | 45% a 55% |
| Almacenamiento (periodo largo) | 4°C |
Resultado de Laboratotio
En estrecha colaboración con el grupo de Volker Doetsch y Frank Bernhard, Instituto de Biofísica de la Universidad de Frankfurt, Alemania, proporcionamos un sistema abierto que se puede adaptar para una variedad de aplicaciones, con protocolos dedicados para proteínas de membrana, intercambio continuo (diálisis ) reacciones, y muchos más. Este sistema requiere más trabajo inicialmente que los kits listos para usar, pero proporciona la máxima flexibilidad en las variaciones de reacción.
Figura 1. Expresión libre de células estándar frente a HiYield de GFP. 1,7: marcador de PM, 2-6: expresión de lisado de alto rendimiento; variación de la concentración de Mg2+ (14, 16, 18, 20,22 mM). 8-12: Expresión de lisado estándar, misma variación de concentraciones de Mg2+. Se observó un óptimo de Mg2+ a ca. 16 mM para estas combinaciones de lisados libres de células y otros componentes de reacción. Los rendimientos oscilan entre 1,3 y 5 mg/ml para reacciones de alto rendimiento y entre 1 y 3,8 mg/ml para reacciones estándar. Datos proporcionados amablemente por Frank Bernhard, Universidad de Frankfurt, Departamento de Química Biofísica.
Equipo y Materiales requeridos adicinalmente
| Required equipment | Micropipettor and Micropipetting tips Thermomix / shaking incubator for 500 rpm and 30°C incubation Ultrasonic device (Optional) Dialysis chambers and feeding mix reservoirs, depending on reaction scales. Alternatively home-built dialysis chambers combined with dialysis membrane, cutoff 12-14 kDa. |
| Additional materials & chemicals | 1,4-Dithiotreitol (DTT) Acetyl phosphate lithium potassium salt (ACP) Acetic AcidAdenosine 5’-triphosphate (ATP) Amino acids for cell-free expression Complete protease inhibitor cocktailCytidine 5’-triphosphate di-sodium salt (CTP) Dipotassium hydrogen phosphate (K2HPO4) Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) Folinic acid calcium salt Guanosine 5’-triphosphate di-sodium salt (GTP) 2-(4-(2-Hydroxyethyl)- 1-piperazinyl)-ethane sulfonic acid (HEPES) Magnesium acetate tetrahydrate (Mg(oAc)2) PEG 8,000 Phosphoenol pyruvic acid monopotassium salt (PEP) Potassium acetate (KoAc) Potassium chloride (KCl) Potassium dihydrogenphosphate (KH2PO4) Potassium hydroxide (KOH) Pyruvate kinase (PK) RiboLock RNase inhibitor Sodium azide (NaN3) Sodium chloride Tris base tRNA E.coli MRE 600 Uridine 5’-triphosphate tri-sodium salt (UTP) |
| Project specific materials | Template DNA Optional: Positive control template DNA Recommended: Suitable affinity chromatography matrix or magnetic beads SDS-PAGE/ Western Blot equipment and antibody For membrane protein expressions: Pre-assembled MSP nanodisc For membrane protein expressions: Detergents, e.g. Decylmaltoside, dodecylmaltoside |
Bibligrafía
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