Amplite® IR se puede utilizar en reacciones enzimáticas acopladas para detectar la actividad de muchas oxidasas y/o enzimas/sustratos o cofactores relacionados, como glucosa, acetilcolina y colesterol, L-glutamato, aminoácidos etc.
Descripción
Nuestro Amplite® IR es un sustrato de peroxidasa fluorogénica que genera fluorescencia infrarroja cercana al reaccionar con peroxidasa y H2O2. Se puede utilizar para detectar tanto H2O2 como peroxidasa.
Amplite® IR genera una sustancia que tiene una absorción máxima de 647 nm con una emisión máxima de 670 nm. Esta absorción y fluorescencia del infrarrojo cercano minimizan el fondo del ensayo que a menudo es causado por la autoabsorción y/o la autofluorescencia de muestras biológicas que rara vez absorben luz más allá de 600 nm. A diferencia de otros sustratos de HRP, como las dihidrofluoresceínas y las dihidrorodaminas, la oxidación por aire de Amplite® IR es mínima.
En comparación con Ampplex Red™, Amplite® IR genera una fluorescencia que es independiente del pH entre pH 4 y 10. Además, tiene una excelente solubilidad en agua. Es una alternativa superior a Amplex Red™ para las detecciones que requieren un pH bajo donde Amplex Red™ tiene una fluorescencia significativamente reducida. Hemos utilizado Amplite® IR para detectar HRP en bastantes inmunoensayos.
Amplite® IR también se puede utilizar para detectar trazas de H2O2. Dado que el H2O2 se produce en muchas reacciones enzimáticas redox, Amplite® IR se puede utilizar en reacciones enzimáticas acopladas para detectar la actividad de muchas oxidasas y/o enzimas/sustratos o cofactores relacionados, como glucosa, acetilcolina y colesterol, L-glutamato, aminoácidos etc.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-11009 | Amplite® IT, AAT Bioquest | 1 mg |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelación a <-15 °C. Minimizar la exposición a la luz, disecado.
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 640 nm |
| Emisión | 680 nm |
| Cuttoff | 650 nm |
| Placa recomendada | Placa negra |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 648 |
| Emisión (nm) | 668 |
Preparación de Soluciones de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre de Amplite IR :
Agregue la cantidad apropiada de DMSO anhidro para preparar una solución madre Amplite IR de 10 a 25 mM.
Preparación de Soluciones de Trabajo
Solución de trabajo Amplite IR (2X):
Para lograr una concentración final por pocillo de 50 a 100 µM en buffer de fosfato de 50 mM o el buffer de su elección, prepare una solución de concentración de 100 a 200 µM en un tubo. Se requieren 50 µL por pocillo. Nota: Amplite IR es inestable en presencia de tioles como DTT y b-mercaptoetanol. Los tioles superiores a 10 μM (concentración final) podrían disminuir significativamente el rango dinámico del ensayo. El NADH y el glutatión (reducido de: GSH) pueden interferir con el ensayo. Nota: Recomendamos utilizar una solución madre nueva cada vez que realice experimentos.
Imagenes
Figura 1. La respuesta a la dosis de H2O2 se midió en una placa negra sólida de 96 pocillos con el kit de ensayo de peróxido de hidrógeno fluorimétrico Amplite®.
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Bibliografía
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Referencias
Ver todas las 61 referencias: Citation Explorer
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FAQ
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?
AssayWise
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Glycerol 3-Phosphate Assays
Catalase Detection
Hydrogen Peroxide Detection