Amplite® Red es una de las sondas fluorogénicas más sensibles y estables para detectar HRP y H2O2.
Descripción
Nuestro Amplite® Red es un sustrato de peroxidasa fluorogénica sensible que genera un producto fluorescente muy rojo que tiene una absorción máxima de 571 nm y una emisión máxima de 585 nm.
A diferencia de otros sustratos de HRP, como las dihidrofluoresceínas y las dihidrorodaminas, la oxidación por aire de Amplite® Red es mínima. Amplite® Red es una de las sondas fluorogénicas más sensibles y estables para detectar HRP y H2O2. Amplite® Red se ha utilizado ampliamente para detectar HRP en muchos inmunoensayos. Por otro lado, Amplite® Red también se puede utilizar para detectar trazas de H2O2. La detección de H2O2 basada en Amplite® Red es al menos un orden de magnitud más sensible que el ensayo de escopoletina comúnmente usado para H2O2.
Debido a que el H2O2 se produce en muchas reacciones enzimáticas redox, Amplite® Red puede usarse en reacciones enzimáticas acopladas para detectar la actividad de muchas oxidasas y/o enzimas/sustratos o cofactores relacionados, como glucosa, acetilcolina y colesterol, L-glutamato, aminoácidos , etc.
| Catalogo | Producto | Presentación |
|---|---|---|
| AAT-11011 | Amplite® Red AAT Bioquest | 1000 Ensayos |
Importante, Solo para uso en investigación (RUO). Almacenamiento: Congelación a <-15 °C. Minimizar la exposición a la luz.
Plataforma
Lector de Microplacas de Flourescencia
| Excitación | 540 nm |
| Emisión | 590 nm |
| Cuttoff | 550 nm |
| Placa recomendada | Placa negra |
Espectro
Abrir en Advanced Spectrum Viewer
Propiedades Espectrales
| Excitación (nm) | 571 |
| Emisión (nm) | 584 |
Preparación de Soluciones de Stock
A menos que se indique lo contrario, todas las soluciones madre no utilizadas deben dividirse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C después de la preparación. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Solución madre de AmpliteTM Red (250X):
Agregue 200 ml de DMSO anhidro en el vial y mezcle bien. La solución madre debe usarse con prontitud. Cualquier solución no utilizada debe dividirse en alícuotas y volver a congelarse a < -20 oC. Nota: Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación y protéjalo de la luz.
Preparación de Soluciones de Trabajo
- Solución de trabajo de peroxidasa roja AmpliteTM (1X):
Agregue 20 μL de solución madre AmpliteTM Red (250X) en 5 mL de buffer de fosfato 50 mM o el buffer de su elección, pH 7 con H2O2 200 mM. Nota: AmpliteTM Red es inestable en presencia de tioles como DTT y b-mercaptoetanol. Los tioles superiores a 10 μM (concentración final) podrían disminuir significativamente el rango dinámico del ensayo. El NADH y el glutatión (reducido de: GSH) pueden interferir con el ensayo - Solución de trabajo AmpliteTM Red H2O2 (1X):
Agregue 20 μL de solución madre AmpliteTM Red (250X) en 5 mL de buffer de fosfato 50 mM o el buffer de su elección, pH 7 con 0,4 unidades/mL de peroxidasa. Nota: AmpliteTM Red es inestable en presencia de tioles como DTT y b-mercaptoetanol. Los tioles superiores a 10 μM (concentración final) podrían disminuir significativamente el rango dinámico del ensayo. El NADH y el glutatión (reducido de: GSH) pueden interferir con el ensayo.
Imagenes
Figura 1. La respuesta a la dosis de HRP se midió con el kit de ensayo de peroxidasa fluorimétrica Amplite® en una placa negra utilizando un lector de microplacas de fluorescencia Gemini (Molecular Devices).
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Bibliografía
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Referencias
Ver todas las 61 referencias: Citation Explorer
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FAQ
Are coumarins water-soluble?
Are NADH and ROS related?
Can I measure NADPH without lysing my cells?
Can I use Amplite Fluorimetric Glutamic Acid Assay Kit with an absorbance microplate reader?
How are fatty acids activated?
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